1.病原體分離

　　鉤體不易著色，一般顯微鏡很難觀察到，必須采用黑底映光法直接查找鉤體。在發(fā)病10天內(nèi)可從血液及腦脊液中分離出鉤體。第二周尿中可檢出鉤體。鉤體從體液或組織中分離需要特殊的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和培養(yǎng)基。

　　最近用超速離心集菌后直接鏡檢法、熒光抗體染色法、原血片鍍銀染色法及甲苯藍(lán)染色等方法直接檢查病原體，可達(dá)到快速診斷目的，陽性率在50%左右，有助于早期診斷。

　　動(dòng)物接種是一種分離病原體的可靠方法，將患者的血液或其他體液接種于動(dòng)物（幼年豚鼠和金黃地鼠）腹腔內(nèi)，晚期病例可用尿液接種于動(dòng)物腹部皮下。接種3～5天，用暗視野檢查腹腔液，亦可在接種3～6天時(shí)取心血檢查。動(dòng)物接種的陽性率較高，但所需時(shí)間較長，所需費(fèi)用大。

　　2.血清學(xué)試驗(yàn)

　?、拍軆r(jià)試驗(yàn)（凝溶試驗(yàn)）：有較高的特異性和敏感性，但需不同型別活菌操作，凝集素一般在病后7～8天出現(xiàn)，逐漸升高，以超過1∶400效價(jià)為陽性，可持續(xù)數(shù)月到數(shù)年。間隔兩周雙份血清，效價(jià)增高4倍以上為陽性。

　?、泼嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：比凝溶試驗(yàn)陽性出現(xiàn)時(shí)間更早和更靈敏。發(fā)現(xiàn)顯微鏡凝集試驗(yàn)與ELISA的總符合率達(dá)86.2%.近年來國外已普遍采用鉤體IgM抗體技術(shù)，有高度特異性。

　?、情g接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)：將從鉤體菌體中提取的一種抗原成分，將其吸附于人“O”型紅細(xì)胞表面致敏，遇到同種抗體，即發(fā)生紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，本試驗(yàn)具鉤體感染的屬特異性而無群或型的特異性，較凝溶試驗(yàn)陽性出現(xiàn)早，操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備，適合基層推廣應(yīng)用。

　?、乳g接紅細(xì)胞溶解試驗(yàn)：用鉤體抗原物質(zhì)將新鮮綿羊紅細(xì)胞致敏，在補(bǔ)體存在的條件下與含有抗體的血清混合時(shí)發(fā)生溶血，較間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)的靈敏性為高。

　　⑸間接熒光抗體法：此法是將標(biāo)準(zhǔn)鉤體菌株作成涂片，然后將檢測(cè)病人的血清滴在已知菌株的玻片上，經(jīng)洗滌，如病人血清中具有抗體，抗原抗體結(jié)合，再用抗人球蛋白熒光抗體與此復(fù)合物結(jié)合，發(fā)生熒光，即為陽性，此法無型特異法。本法檢出抗體時(shí)間及陰轉(zhuǎn)時(shí)間均較顯凝試驗(yàn)抗體為早，具有一定的早期診斷意義。

　　上述各項(xiàng)檢測(cè)，均是用已知鉤體抗原檢測(cè)血中出現(xiàn)的相應(yīng)抗體，不能做到早期診斷。近年來開展了乳膠凝集抑制試驗(yàn)，反向間接血凝試驗(yàn)與間接熒光抗體染色試驗(yàn)等可以測(cè)出血中早期存在的鉤體，已取得了早期診斷的初步成果。

　　3.早期診斷

　?、陪^端螺旋體DNA探針技術(shù)：早已應(yīng)用于臨床，schoone等1984年證實(shí)，用黃疸出血群哥本哈根型Wijnberg株DNA制備探針，可在硝酸纖維素濾膜上檢出2pg的同源DNA.且致病性鉤體不同血清群PatocⅠ株呈交義雜交現(xiàn)象。作者認(rèn)為DNA探針雜交技術(shù)是一種敏感性高的早期診斷方法。

　?、艱NA基因擴(kuò)增技術(shù)：聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的DNA擴(kuò)增技術(shù)目前已引入鉤體病的診斷領(lǐng)域。因PCR只要有引物便可進(jìn)行試驗(yàn)，且方法簡(jiǎn)便，并適用于大數(shù)量標(biāo)本的流行病學(xué)調(diào)查。VanEys等1989年用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)哈焦型鉤體感染的牛尿作了檢測(cè)研究，提出PCRDNA擴(kuò)增技術(shù)完全可作鉤體病診斷的一個(gè)新型方法。