凝膠層析時(shí)為什么較快通過凝膠柱是大的溶質(zhì)分子?
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凝膠層析又稱分子篩過濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點(diǎn)是層析所用的凝膠屬于惰性載體,不帶電荷,吸附力弱,操作條件比較溫和,可在相當(dāng)廣的溫度范圍下進(jìn)行,不需要有機(jī)溶劑,并且對(duì)分離成分理化性質(zhì)的保持有獨(dú)到之處。對(duì)于高分子物質(zhì)有很好的分離效果。
不同類型凝膠的篩孔的大小不同。如果將這樣的凝膠裝入一個(gè)足夠長(zhǎng)的柱子中,作成一個(gè)凝膠柱。當(dāng)含有大小不同的蛋白質(zhì)樣品加到凝膠柱上時(shí),比凝膠珠平均孔徑小的蛋白質(zhì)就要連續(xù)不斷地穿入珠子的內(nèi)部,這樣的小分子不但其運(yùn)動(dòng)路程長(zhǎng),而且受到來自凝膠珠內(nèi)部的阻力也很大,所以越小的蛋白質(zhì),把它們從柱子上洗脫下來所花費(fèi)的時(shí)間越長(zhǎng)。凝膠中只有很少的孔徑可接受大的蛋白。因此,大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠珠之間的縫隙首先被洗脫下來。
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