方法名稱：急支糖漿—阿魏酸的測定—高效液相色譜法

應(yīng)用范圍：該方法采用高效液相色譜法測定急支糖漿中阿魏酸的含量。

該方法適用于中藥制劑急支糖漿。

方法原理：供試品水浴蒸至近干，加甲醇進(jìn)行熱回流提取，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙猓韵←}酸調(diào)pH1~2,煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚提取，乙醚提取液再用2%碳酸鈉提取，碳酸鈉提取液用乙酸乙酯洗滌，棄去洗滌液，堿液用稀鹽酸調(diào)pH1~2,用乙醚提取，乙醚提取液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓^濾，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處檢測阿魏酸的吸收值，計算出其含量。

試劑：1.甲醇（色譜純）

2. 乙酸

3. 乙醚

4. 碳酸鈉

5. 鹽酸

儀器設(shè)備：1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Shim-Pack CLC-ODS分析柱(150×4.6mm,5μm)，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算為4000。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：甲醇 1%乙酸水 = 28 72

2.2 檢測波長：323nm

2.3柱溫：室溫

試樣制備：1. 稱取供試品

精密吸取該品25mL。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品30mg,置50mL量瓶中，加甲醇溶解，并加至刻度，混勻。精密吸收5mL置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，得對照品溶液。

3.供試品溶液的制備

供試品水浴蒸至近干，加甲醇加熱回流提取2次，每次50mL,回流30min,濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，以稀鹽酸調(diào)pH1~2,煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚20,10,10,10,10mL提取4次，合并乙醚液，用2%碳酸鈉20,10,10,10mL提取4次，合并提取液，用乙酸乙酯25mL洗滌，棄去洗滌液，堿液用稀鹽酸調(diào)pH1~2,以乙醚20,10,10,10mL提取4次，合并乙醚液,40~45℃蒸干，殘?jiān)芗蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取上述對照品溶液4,8,12,16,20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處測定阿魏酸的吸收值，以進(jìn)樣量對峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測定

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處測定阿魏酸的吸收值，計算出其含量。