單相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)方法：

原理一種定量試驗(yàn)，將一定量的抗體混合于瓊脂內(nèi)，傾注于玻片上，凝固后，在瓊脂層上打孔，再將抗原加入孔中，使其向四周擴(kuò)散?？乖贵w復(fù)合物形成的沉淀環(huán)直徑與抗原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，則未知標(biāo)本中的抗原含量即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出。本試驗(yàn)主要用于檢查標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清IgG含量。

材料

1.抗體：羊抗人IgG單價(jià)抗血清。

2.抗原：待檢血清。

3.3%生理鹽水瓊脂、生理鹽水、載玻片、直徑3mm打孔器、小三角燒瓶、毛細(xì)滴管、濕盒。

方法

1、制備含抗體的瓊脂板取羊抗人IgG單價(jià)抗血清一瓶（效價(jià)1：80），量取0.3ml于一小三角燒瓶中，加生理鹽水11.7ml（40倍稀釋混勻，置56℃水浴中恒溫2～3分鐘）。

取3%生理鹽水瓊脂一管，隔水加熱使溶，然后置56℃水浴中，待瓊脂溫度降至56℃時(shí)，立即加入等量1：40稀釋抗血清，迅速輕輕混勻，勿使產(chǎn)生氣泡，迅速傾入載玻片上，每片3.5ml，待凝固后打孔。

2、稀釋待檢血清將待檢血清用生理鹽水作40倍稀釋。

3、打孔、加樣每份檢樣加兩孔，加滿（但不要溢出），加樣時(shí)毛細(xì)滴管尖端不要?jiǎng)澠骗傊?

4、溫育將瓊脂板置搪瓷盒，墊濕紗布或海綿以防干燥，37℃恒溫箱24h.

結(jié)果

觀察與分析測量并求出每份檢樣兩孔的沉淀環(huán)平均直徑，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線求出IgG含量。