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核酸的變性|復性|雜交

2016-10-18 19:41 醫(yī)學教育網(wǎng)
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核酸的變性|復性|雜交:

1.核酸變性

核酸變性是指核酸雙螺旋結(jié)構(gòu)解開,氫鍵斷裂,但并不涉及核苷酸間磷酸二酯鍵的斷裂。若磷酸二酯鍵的斷裂稱為降解,核酸降解時,核酸分子量降低。而核酸的變性并不引起核酸分子量的變化。

引起核酸變性的因素很多。由于溫度升高而引起的變性稱熱變性。如將DNA的稀鹽溶液加熱到50℃以上幾分鐘,雙螺旋結(jié)構(gòu)即破壞,氫鍵斷裂,DNA分子的兩條鏈彼此分離,形成無規(guī)則線團。變性后的DNA,由于結(jié)構(gòu)上的變化,因而發(fā)生了一系列理化性質(zhì)的改變,如260nm處紫外吸收值升高(稱增色效應(yīng)),粘度降低以及生物學活性喪失等。能使50%DNA分子發(fā)生變性的溫度稱為變性溫度(Tm).Tm一般為70-85℃。Tm值與分子中G-C含量有關(guān),即G-C配對數(shù)愈多,則Tm值愈高,反之愈低。由于溶液酸堿度的改變而引起的變性稱酸堿變性。對DNA分子來說,堿基對在pH4.0-11.0之間最為穩(wěn)定,超此范圍,可引起DNA分子酸堿變性。乙酸、丙酮等有機溶液及尿素也可引起核酸的變性。

2.核酸復性

變性DNA在適當條件下,又可使兩條彼此分離的鏈重新締合而形成雙螺旋結(jié)構(gòu),這一過程稱為復性或退火。復性后的DNA可基本恢復一系列的理化性質(zhì),生物學活性也可得到部分恢復醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理。

變性核酸的復性是有條件的。如將熱變性的DNA溶液驟然冷低溫,DNA不可能復性。只有緩慢地將它冷卻時,DNA才有可能復性。另外,變性DNA片段越大,則復性越慢。變性DNA濃度越大則越易復性。

3.核酸雜交

不同來源的DNA加熱變性后,只要兩條多核苷酸鏈的堿基有一定數(shù)量能彼此互補,就可以經(jīng)退火處理復性現(xiàn)象,形成新的雜交體雙螺旋結(jié)構(gòu),這種依據(jù)相應(yīng)堿基配對而使不完全互補的兩條鏈相互結(jié)合稱為分子雜交。因此分子雜交的基礎(chǔ)是DNA的變性與互補,也可以雜交形成新的雙螺旋結(jié)構(gòu)。目前雜交技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于核酸結(jié)構(gòu)與功能的研究醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理。將已知的特定基因(如先天性遺傳疾病的某些特定基因)用同位素標記,制備成基因探針,利用分子雜交技術(shù),基因探針可與同源序列互補形成雜交體,因此可用檢測組織細胞內(nèi)有無特定基因或DNA片段,如臨床上已應(yīng)用于產(chǎn)前診斷遺傳性疾病。

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