霍亂弧菌的檢測(cè)方法：

1.生化鑒定：

新從病人分離出古典型霍亂弧菌和ELtor弧菌比較典型，為革蘭氏陰性菌，菌體彎曲呈弧狀或逗點(diǎn)狀，菌體一端有單根鞭毛和菌毛，無(wú)莢膜與芽胞。經(jīng)人工培養(yǎng)后，易失去弧形而呈桿狀。取霍亂病人米泔水樣糞便作活菌懸滴觀察，可見細(xì)菌運(yùn)動(dòng)極為活潑，呈流星穿梭運(yùn)動(dòng)。營(yíng)養(yǎng)要求不高，在PH8.8～9.0的堿性蛋白胨水或平板中生長(zhǎng)良好。因其他細(xì)菌在這一PH不易生長(zhǎng)，故堿性蛋白胨水可作為選擇性增殖霍亂弧菌的培養(yǎng)基。在堿性平板上菌落直徑為2mm，圓形，光滑，透明。

霍亂弧菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，靛基質(zhì)反應(yīng)陽(yáng)性，當(dāng)培養(yǎng)在含硝酸鹽及色氨酸的培養(yǎng)基中，產(chǎn)生靛基質(zhì)與亞硝酸鹽，在濃硫酸存在時(shí)，生成紅色，稱為霍亂紅反應(yīng)，但其他非致病性弧菌亦有此反應(yīng)，故不能憑此鑒定霍亂弧菌。EL Tor型霍亂弧菌與古典型霍亂弧菌生化反應(yīng)有所不同。前者Vp陽(yáng)性而后者為陰性。前者能產(chǎn)生強(qiáng)烈的溶血素，溶解羊紅細(xì)胞，在血平板上生長(zhǎng)的菌落周圍出現(xiàn)明顯的透明溶血環(huán)，古典型霍亂弧菌則不溶解羊紅細(xì)胞。個(gè)別EL Tor型霍亂弧菌株亦不溶血。

2.血清凝集法：

根據(jù)弧菌O抗原不同，分成Ⅵ個(gè)血清群，第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個(gè)生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個(gè)血清型：含AC者為原型（又稱稻葉型），含AB者為異型（又稱小川型），A、B、C均有者稱中間型（彥島型）。

1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)引起霍亂流行的新血清型菌株，它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂完全相同，但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集，抗01群的抗血清對(duì)0139菌株無(wú)保護(hù)性免疫。在水中的存活時(shí)間較01群霍亂弧菌長(zhǎng)，因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株，推薦使用天津生物芯片生產(chǎn)的霍亂弧菌診斷血清。

3.聚合酶鏈反應(yīng)法：

1）普通聚合酶鏈反應(yīng)法。

核酸擴(kuò)增技術(shù)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對(duì)應(yīng)于待測(cè)病原微生物某一段特異性序列的兩端，然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過(guò)程反復(fù)擴(kuò)增，使靶序列放大上萬(wàn)倍甚至上百萬(wàn)倍而被檢測(cè)出來(lái)。一般選擇霍亂腸毒素基因ctx的保守序列作為靶基因。一些非產(chǎn)毒株（如環(huán)境來(lái)源的菌株）有可能通過(guò)基因水平轉(zhuǎn)移獲得毒力基因成為產(chǎn)毒株，若僅檢測(cè)ctx基因容易造成漏檢。因此，霍亂弧菌的其他重要基因，如毒力協(xié)同調(diào)節(jié)菌毛A基因（tcp A）、o抗原基因（rfb）、外膜蛋白基因（omp）以及毒力表達(dá)調(diào)控基因（toxR）等也被選用為PcR的靶基因，這大大提高了檢測(cè)的特異度。

2 ）多重PCR法。

與常規(guī)PCR相比，多重PCR一次反應(yīng)可檢測(cè)多個(gè)基因，節(jié)省了時(shí)間和成本。國(guó)內(nèi)、外許多學(xué)者選用霍亂弧菌的毒素基因ctx、tcp與其他基因如ompW、rfb、hly進(jìn)行組合，作為共同的靶基因，克服了由于毒力基因特異度不夠高而造成的假陽(yáng)性。多重PcR同時(shí)可準(zhǔn)確區(qū)分不同血清型的霍亂弧菌和快速鑒定其是否為產(chǎn)毒株，可謂一舉多得，大大提高了檢測(cè)效率。

3）熒光定量PCR法。

熒光定量PCR自動(dòng)化程度高、特異性強(qiáng)、無(wú)交叉污染，在霍亂弧菌的快速診斷中得到廣泛應(yīng)用。尤其是近年來(lái)，隨著引物與探針的設(shè)計(jì)更精確、多通道熒光PCR儀的開發(fā)與廣泛使用，多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)日臻成熟，并以其高通量、低成本、高效率等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于病毒、細(xì)菌、真菌等多種病原體的快速檢測(cè)，成為應(yīng)用的熱點(diǎn)。

4.基因芯片：

與PCR方法相比，基因芯片技術(shù)能同時(shí)獲得更多病原學(xué)、生物學(xué)方面的信息，從而更為全面地分析、掌握病原微生物的特征。Vora等[12]運(yùn)用基因芯片技術(shù)對(duì)多種致病性弧菌的毒力、毒素、耐藥基因及潛在的毒力基因進(jìn)行全面分析，對(duì)掌握這些細(xì)菌的致病性及進(jìn)行有效預(yù)防、控制等具有重要意義。醫(yī)學(xué).教育網(wǎng)整理但基因芯片成本較高，距離推廣應(yīng)用尚需時(shí)間等待