蛋白質(zhì)濃縮有多種方法,有鹽析,超濾,離子交換,有機(jī)溶劑沉淀等方法。
有機(jī)溶劑沉淀法:有機(jī)溶劑能降低溶液的電解常數(shù),從而增加蛋白質(zhì)分子上不同電荷的引力,導(dǎo)致溶解度的降低;另外,有機(jī)溶劑與水的作用,能破壞蛋白質(zhì)的水化膜,故蛋白質(zhì)在一定濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度差異而分離的方法,稱“有機(jī)溶劑分段沉淀法”,它常用于蛋白質(zhì)或酶的提純。使用的有機(jī)溶劑多為乙醇和丙酮。高濃度有機(jī)溶劑易引起蛋白質(zhì)變性失活,操作必須在低溫下進(jìn)行,并在加入有機(jī)溶劑時注意攪拌均勻以避免局部濃度過大。由此法析出的沉淀一般比鹽析容易過濾或離心沉降,分離后的蛋白質(zhì)沉淀,應(yīng)立即用水或緩沖液溶解,以降低有機(jī)溶劑濃度。操作時的pH值大多數(shù)控制在待沉淀蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)附近,有機(jī)溶劑在中性鹽存在時能增加蛋白質(zhì)的溶解度,減少變性,提高分離的效果,在有機(jī)溶劑中添加中性鹽的濃度為0.05mol/L左右,中性鹽過多不僅耗費(fèi)有機(jī)溶劑,可能導(dǎo)致沉淀不好。沉淀的條件一經(jīng)確定,就必須嚴(yán)格控制,才能得到可重復(fù)的結(jié)果。醫(yī)學(xué)教育`網(wǎng)搜集整理有機(jī)溶劑濃度通常以有機(jī)溶劑和水容積比或用百分濃度表示。有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)分辨力比鹽析法好,溶劑易除去;缺點(diǎn)是易使酶和具有活性的蛋白質(zhì)變性。故操作時要求條件比鹽析嚴(yán)格。對于某些敏感的酶和蛋白質(zhì),使用有機(jī)溶劑沉淀尤其要小心。
可與水混合的有機(jī)溶劑,如酒精、甲醇、丙酮等,對水的親和力很大,能破壞蛋白質(zhì)顆粒的水化膜,在等電點(diǎn)時使蛋白質(zhì)沉淀。在常溫下,有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)往往引起變性。例如酒精消毒滅菌就是如此,但若在低溫條件下,則變性進(jìn)行較緩慢,可用于分離制備各種血漿蛋白質(zhì)。