由于抗核抗體(ANA)的復雜性及多樣性,故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術等。
常用間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence,IIF)作為總的ANA篩選試驗。鼠肝常用于檢測抗核抗體,但近十年來多被HEp-2細胞所代替,這是因為HEp-2細胞具有以下特點:人源性;細胞核大;分裂期細胞多;可大批量培養(yǎng)。當然,單個細胞不可能替代組織切片,所以鼠組織切片仍繼續(xù)用于自身抗體的檢測。
放射免疫法:常用于檢測抗DNA抗體,有Farr法及過濾法。
(1)Farr法的原理為用同位素標記DNA,被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合,經(jīng)50%硫酸銨飽和液沉淀,然后比較沉淀物和上清液中的放射活性,從而得出DNA結合活性,一般結合率大于20%為陽性。
?。?)過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進行過濾,游離的DNA被濾去而與抗體結合的復合物被阻留在濾膜上。
ELISA法:臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體,其重復性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。目前已有試劑盒供應。
免疫印跡(immunoblotting)法:先將混合抗原作凝膠電泳,分離開不同的區(qū)帶,然后將這些帶轉印到硝酸纖維素膜上,最后用酶標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析。由于該試驗不需純化的單個抗原,可在同一固相上作多項分析檢測,靈敏度高,特異性強。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測,如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。
另外,還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴散法、醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。這些試驗要求的實驗條件比較低,但敏感性也比較低。
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