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酶活性|酶質(zhì)量測(cè)定方法及其評(píng)價(jià)

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酶活性|酶質(zhì)量測(cè)定方法及其評(píng)價(jià):

1.酶活性測(cè)定方法

(1)按反應(yīng)時(shí)間分類法:20世紀(jì)50年代以前大都使用固定時(shí)間法。這種方法是以酶催化反應(yīng)的平均速度來計(jì)算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。這種方法用自動(dòng)生化分析儀上完成,可以測(cè)酶反應(yīng)的初速度,其結(jié)果遠(yuǎn)比固定時(shí)間法準(zhǔn)確,在高濃度標(biāo)本尤為明顯,但本法也受到反應(yīng)時(shí)間,反應(yīng)溫度,試劑等的影響,應(yīng)加以注意。

1)定時(shí)法:通過測(cè)定酶反應(yīng)開始后某一時(shí)間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法,稱為兩點(diǎn)法,其中t1往往取反應(yīng)開始的時(shí)間。在酶反應(yīng)一定時(shí)間后,往往通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白沉淀劑等,使反應(yīng)完全停止,所以也叫中止反應(yīng)法。

2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法:又稱為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。在酶反應(yīng)過程中,用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變,通過計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。

3)平衡法:通過測(cè)定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點(diǎn)法。

(2)按監(jiān)測(cè)方法分類法:可分為①分光光度法;②旋光法;③熒光法;④電化學(xué)方法;⑤化學(xué)反應(yīng)法;⑥核素測(cè)定法;⑦量熱法。

2.酶質(zhì)量測(cè)定法

隨著免疫技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了利用酶的抗原性,通過抗原、抗體反應(yīng)來直接測(cè)定酶的質(zhì)量,直接用質(zhì)量單位ng/ml、μg/L來表示酶含量的高低。免疫學(xué)方法與測(cè)定活性方法相比,其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度和特異性高,不受體液中其他物質(zhì)的影響,特別是抑制劑和激活劑的影響,當(dāng)血液中有酶抑制劑存在,或因基因缺陷,合成了無活性的酶蛋白時(shí),可以測(cè)出滅活的酶蛋白量,有利于疾病診斷和科學(xué)研究。如肌酸激酶同酶MB(CKMB)質(zhì)量測(cè)定較活性測(cè)定對(duì)疾病的診斷價(jià)值高。

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