HLA細(xì)胞法分型試驗(yàn)是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技士/技師/主管技師考試復(fù)習(xí)需要了解的檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識，醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理了相關(guān)內(nèi)容與考生分享，希望給予大家?guī)椭?

HLA-D和DP位點(diǎn)的抗原須用細(xì)胞法分型進(jìn)行鑒定，所以又稱LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鑒定方法普遍采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture，MLC），也稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixedlymphocytereaction，MLR）。

1.試驗(yàn)方法將分離的反應(yīng)細(xì)胞（通常是患者的淋巴細(xì)胞）與刺激細(xì)胞（通常是供者或已知的標(biāo)準(zhǔn)淋巴細(xì)胞）配制成1×106/ml濃度的懸液，各加0.2ml到反應(yīng)管中；放置37℃和5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)5～6天。培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行涂片染色，觀察并計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞；也可在培養(yǎng)結(jié)束前5～12小時加入3H-TdR，收獲后用液體閃爍儀計(jì)數(shù)細(xì)胞的放射性。試驗(yàn)結(jié)果的常用表示方式是刺激指數(shù)（SI）。

MLC分為雙向法和單向法。雙向MLC是反應(yīng)管中兩種細(xì)胞都有應(yīng)答能力，可以互為刺激細(xì)胞和反應(yīng)細(xì)胞，試驗(yàn)結(jié)果是兩種細(xì)胞反應(yīng)之和。

SI＝2×試驗(yàn)管cpm/（A對照cpm＋B對照cpm）

雙向MLC只能反映兩種細(xì)胞間LD的差別，結(jié)果比較模糊，也不能做LD抗原的分型。單向MLC是將刺激細(xì)胞用絲裂霉素C（mitomycinC）或X線照射先行滅活，但細(xì)胞的抗原性保持不變，因此可作為刺激細(xì)胞而不能作為反應(yīng)細(xì)胞，試驗(yàn)結(jié)果是待檢測細(xì)胞的反應(yīng)，使于結(jié)果分析。

SI＝試驗(yàn)管cpm/自身對照cpm

單向MLC可以用來進(jìn)行HLD-D和DP位點(diǎn)的分型試驗(yàn)，常用的方法有兩類：純合子分型細(xì)胞（homozygoustypingcell，HTC）試驗(yàn)和預(yù)敏淋巴細(xì)胞分型（primedlymphocytetyping，PLT）試驗(yàn)。

2.HTC試驗(yàn)HTC是指細(xì)胞內(nèi)一對同源染色體上兩個HLA單倍型完全相同，所以該位點(diǎn)在細(xì)胞表面只表達(dá)一種抗原；HTC可從近親婚配的子代表中尋找。將一組HTC經(jīng)處理來活后作為刺激細(xì)胞，與待檢細(xì)胞做單向MLC.如果待檢細(xì)胞與刺激細(xì)胞的LD不同，就會發(fā)生反應(yīng)；如果相同便不反應(yīng)；所以試驗(yàn)又稱為陰性分型法醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。當(dāng)SI≤2時可認(rèn)為待檢細(xì)胞與該管HTC的LD抗原相同。本法的缺點(diǎn)是HTC難以得到，而且培養(yǎng)時間長（5～6天），在尸體器官移植時不能應(yīng)用。

3.PLT試驗(yàn)本方法需事先準(zhǔn)備分型細(xì)胞：選擇只有一個單倍型相同的兩個體a/b和a/c（這在雙親與子女之間不難做到），取前者的淋巴細(xì)胞處理后作刺激細(xì)胞，取后者的淋巴細(xì)胞作反應(yīng)細(xì)胞；將兩者進(jìn)行單向混合培養(yǎng)，至第10天使可得到針對b單倍型有特異性免疫應(yīng)答能力的預(yù)致敏分型細(xì)胞（PTL）。依此類推，可以制備出一系列能識別各種已知LD抗原的一套PTL；這些處于休止?fàn)顟B(tài)的致敏記憶細(xì)胞可在液氮中長期保存?zhèn)溆谩?

進(jìn)行PLT試驗(yàn)時，需將待檢淋巴細(xì)胞處理成刺激細(xì)胞，而PTL為反應(yīng)細(xì)胞；如果待檢細(xì)胞的LD抗原與PTL預(yù)先識別的特異性相同，則PTL會迅速出現(xiàn)反應(yīng)（二次應(yīng)答），如不同則不出現(xiàn)快速反應(yīng)，所以本法又稱為陽性分型法。PLT法克服了HTC法試驗(yàn)周期長的缺點(diǎn)，在24小時內(nèi)即可報(bào)出結(jié)果醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理；PTL比HTC容易得到，但真正做起來也復(fù)雜。

不管是CDC試驗(yàn)還是MIC方法，都必須以受檢者的淋巴細(xì)胞作為檢測標(biāo)本，這就大大地限制了檢測方法的應(yīng)用范圍；而且還存在抗體來源困難、細(xì)胞培養(yǎng)周期過長等缺點(diǎn)；所以近年來將分子生物學(xué)技術(shù)引入了HLA檢測的領(lǐng)域，產(chǎn)生了DNA分型法。DNA分型法是利用PCR技術(shù)將標(biāo)本中的少量目的DNA大量擴(kuò)增，然后再進(jìn)行產(chǎn)物鑒定的方法（原理和步驟在此不予討論），特點(diǎn)是靈敏度高，試劑來源容易，應(yīng)用范圍廣，陳舊的或微量的標(biāo)本都可進(jìn)行檢測，在移植醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)和其他方面都有廣闊的前途。