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小腸結(jié)腸炎耶爾森菌-微生物檢驗(yàn)

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌:

一、細(xì)菌的傳播與致病

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌廣泛分布于自然界,是能在冷藏溫度下生長(zhǎng)的少數(shù)幾種腸道致病菌之一。本菌天然寄居在多種動(dòng)物體內(nèi),如豬、鼠、家畜等,通過(guò)污染食物(牛奶、豬肉等)和水經(jīng)糞—口途徑感染或因接觸染疫動(dòng)物而感染。它除引起胃腸道癥狀外,還能引起呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、骨骼結(jié)締組織等疾患,甚至可引起敗血癥,造成死亡。該菌還是重要的食源性致病菌,很多國(guó)家都已將該菌列為進(jìn)出口食品的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。

本病多發(fā)生于冬春季節(jié),可散發(fā)或暴發(fā)流行,多累及嬰兒及兒童。不同年齡患者的癥狀有所不同,5歲以下患兒以腹瀉為多見(jiàn),臨床表現(xiàn)與菌痢不能區(qū)別。本病為自限性的輕型急性胃腸炎,一般表現(xiàn)為腹瀉、發(fā)熱和腹痛,糞便呈黃色水樣或含粘液,帶血或血便者較少見(jiàn),腹瀉每日3~10次,可持續(xù)1~2周,個(gè)別可長(zhǎng)達(dá)3個(gè)月。偶可引起腸道潰瘍、穿孔和腹膜炎。慢性腹瀉常持續(xù)數(shù)月,甚至可擬似慢性特發(fā)性炎性腸病。發(fā)熱從短期高熱到持續(xù)幾周的低熱不等,亦為本病的突出癥狀。5歲以上兒童和青少年常有下腹痛,末梢血白細(xì)胞總數(shù)增加,癥狀極似闌尾炎。在成人中,腸炎后1~2周,有的可出現(xiàn)結(jié)節(jié)性紅斑,常見(jiàn)的并發(fā)癥為活動(dòng)性關(guān)節(jié)炎。此外,尚有腦膜炎及敗血癥等臨床類型。

但國(guó)內(nèi)既往對(duì)該菌重視不夠,醫(yī)務(wù)人員普遍缺乏對(duì)本菌的認(rèn)識(shí),臨床醫(yī)生在對(duì)胃腸道疾病診斷時(shí)很少考慮小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染,檢驗(yàn)人員也很少能為準(zhǔn)確診斷提供依據(jù)。由于診斷不及時(shí),容易造成誤診,多數(shù)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染病人很難得到及時(shí)、針對(duì)性治療,造成感染慢性化和并發(fā)各種合并癥,有些小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染甚至被當(dāng)作闌尾炎施行手術(shù)。

二、細(xì)菌的生物學(xué)特性

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌腸桿菌科耶爾森菌屬,為革蘭氏陰性小桿菌,有毒菌株多呈球桿狀,無(wú)毒株以桿狀多見(jiàn)。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高,能在麥康凱瓊脂上生長(zhǎng),但較其他腸道桿菌生長(zhǎng)緩慢,培養(yǎng)的最適宜溫度為28℃,最適pH值為7~8,初次培養(yǎng)菌落為光滑型,通過(guò)傳代接種后菌落可能呈粗糙型。

本菌具有“嗜冷性”,在水中和低溫下(4℃)能生長(zhǎng),為腸道中能在4℃生長(zhǎng)繁殖的少數(shù)細(xì)菌之一。因此,食品冷藏保存時(shí),應(yīng)防止被該菌污染。

野生動(dòng)物、家畜(豬、狗和貓)、牡蠣和水源中都能分離到本菌,亦可從健康人或患者糞便中分離得到,其傳播方式可能與攝入被尿、糞便污染的食物(尤其是肉類)和接觸感染動(dòng)物等有關(guān)。

本菌可產(chǎn)生耐熱腸毒素,121℃30分鐘不被破壞,對(duì)酸堿穩(wěn)定,pH1~11不失活。腸毒素產(chǎn)生迅速,在25℃下培養(yǎng)12小時(shí),培養(yǎng)基上清液中即有腸毒素產(chǎn)生,24~48小時(shí)達(dá)高峰。腸毒素是引起腹瀉的主要因素。毒力型菌株均有VW抗原(蛋白脂蛋白復(fù)合物),為毒力的重要因子,與侵襲力有關(guān),侵襲力可能是耶爾森菌感染腸道表現(xiàn)的病理基礎(chǔ)。

三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查及其它檢查

1.標(biāo)本采集常為糞便以及食物,也可取血液和尿液等。

糞便標(biāo)本采集要求:采集的動(dòng)物糞便標(biāo)本應(yīng)新鮮,病人的糞便標(biāo)本最好在發(fā)病3~5病日內(nèi),使用抗生素之前。糞便采集量每份不少于5克,置于干凈塑料袋或置于運(yùn)送培養(yǎng)基中于6小時(shí)內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),夏季標(biāo)本的保存和運(yùn)送要注意冷藏。原則上每天采集的標(biāo)本可分兩次送至實(shí)驗(yàn)室,即上午的標(biāo)本中午12時(shí)前送到,下午的標(biāo)本晚6時(shí)前送到,以便于及時(shí)開(kāi)展檢測(cè)。

2.分離培養(yǎng)——以糞便標(biāo)本為例

(1)冷增菌糞便與改良磷酸鹽緩沖液以1:10混合于4℃增菌,并于10天,20天分別轉(zhuǎn)種麥康凱MAC平板或耶爾森菌屬專用選擇性培養(yǎng)基CIN于25℃培養(yǎng)24~48h.

(2)該菌的菌落在MAC平板上呈無(wú)色透明,在CIN平板上呈粉紅色,偶爾有一圈膽鹽沉淀;

(3)將可疑菌落接種改良克氏雙糖培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)24h~48h,上、下層均為陽(yáng)性(即顯黃色)者接種Rustigian氏尿素培養(yǎng)基(使成濃厚菌懸液),振蕩10秒鐘25℃培養(yǎng)2~4h.

(4)尿素陽(yáng)性者再接種半固體各2管,1管于25℃培養(yǎng)24h,另1管于37℃培養(yǎng)24h.該菌在25℃動(dòng)力陰性,37℃動(dòng)力陰性。

3.生化鑒定(25℃培養(yǎng)):典型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌主要的生化反應(yīng)情況:脲酶陽(yáng)性、硫化氫陰性、VP25℃陽(yáng)性、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陽(yáng)性。發(fā)酵葡萄糖、蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,不發(fā)酵密二糖和鼠李糖。

4.血清分型

四、細(xì)菌的防治

癥狀較輕時(shí),本病多為自限性,無(wú)需抗菌治療。宜進(jìn)行適當(dāng)隔離,糞便及排泄

物要消毒,以免疾病傳播。有失水者及時(shí)補(bǔ)液,以糾正水、電解質(zhì)、酸堿紊亂。對(duì)病程較長(zhǎng),有并發(fā)癥或呈暴發(fā)型者,應(yīng)給予抗菌治療。本菌對(duì)所有氨基糖甙抗生素、

多粘菌素、復(fù)方新諾明、四環(huán)素、呋喃唑酮和喹諾酮類等均敏感。

五、細(xì)菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》中的有關(guān)規(guī)定,人間傳播的微生物名錄(待頒布)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌屬于三類,BSL~2.相關(guān)的防護(hù)事宜包括:

(1)操作要求

1、實(shí)驗(yàn)時(shí),未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意,限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。

3、所有的操作過(guò)程應(yīng)盡量細(xì)心,避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4、對(duì)于污染的銳器,必須時(shí)刻保持高度的警惕,包括針、注射器、玻片、加樣器等。

5、注射和吸取感染材料時(shí),只能使用針頭固定注射器或一次性注射器(即注射器和針頭是一體的)。用過(guò)的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉,或在丟棄前進(jìn)行人工處理,要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中,轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒,最好高壓殺菌。

6、打碎的器皿不能直接用手處理,必須用其它工具處理,如刷子和簸箕、夾子或鑷

7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前,均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒,如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi),密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開(kāi)該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料,在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝,其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。

8、濺出或偶然事件中,明顯暴露于傳染源時(shí),要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀察、治療,保留書(shū)面記錄。

9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后,?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前,要按照相關(guān)的規(guī)定消毒;在離開(kāi)設(shè)施轉(zhuǎn)移前,要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。

(2)安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程,包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開(kāi)啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。

3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí),若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī),若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開(kāi),則可在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。

4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí),需采取面部保護(hù)措施(跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置),以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?

5、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi),必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí),防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理,也可以在洗衣房中洗滌,但不能帶回家中。

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