乳酸左氧氟沙星是我國新研制的第三代喹諾酮類抗菌藥，為氧氟沙星的旋光異構(gòu)體，具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn). 其抗菌活性是光學(xué)對映體D型的8128倍，外消旋體OFLX的2倍. 參照文獻(xiàn)［1-3］，我們建立了用反相高效液相色譜法測定乳酸左氧氟沙星血藥濃度的方法，對18名健康志愿者自身交叉口服兩種乳酸左氧氟沙星片后的藥代動(dòng)力學(xué)和生物利用度進(jìn)行了分析和比較.

材料和方法

1.1材料參比制劑: 乳酸左氧氟沙星片(來立信片，浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格 0.1 g/粒，批號(hào) 040478)；受試制劑:乳酸左氧氟沙星片(天津藥業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司提供，規(guī)格 0.1 g/粒，批號(hào) 030928)；乳酸左氧氟沙星對照品:中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)130455200202. 甲醇(G.R. 北京化工廠，批號(hào) 20020629)，四丁基溴化氨：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，批號(hào) 20040531，二氯甲烷(AR.北京化工廠，批號(hào) 20030319).

島津LC10A高效液相色譜儀，包括LC10A高壓輸液泵、LC10AV紫外可調(diào)檢測器、CTO10A柱溫箱、7125手動(dòng)進(jìn)樣閥、分析之星色譜工作站.

1.2方法

1.2.1分組和血樣采集18名健康志愿者(為醫(yī)學(xué)院校在校學(xué)生)，男性，年齡21～24歲，體質(zhì)量51～70 kg，無煙酒嗜好. 受試前經(jīng)體格檢查及心電圖、肝、腎功能檢查正常. 給藥前2 wk至整個(gè)試驗(yàn)過程結(jié)束未服任何其他藥物，試驗(yàn)期間禁忌煙酒及含咖啡飲料，禁做劇烈活動(dòng)，用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐. 18名健康志愿者隨機(jī)分成兩組，禁食12 h，于早晨服藥前采空白血,7:00開始陸續(xù)服用參比制劑或供試制劑，劑量均為0.2 g， 250 mL溫開水送服，3 h后可以飲水，4 h后用統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)低脂餐. 于服藥后0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 4, 6, 9, 12和24 h，各采集靜脈血4 mL，血樣置標(biāo)號(hào)塑料試管中，室溫放置2 h，3000 r/min離心20 min，分取血清，置-30℃冰箱保存，測定前自然解凍. 間隔1 wk，自身交叉服用另一制劑.

1.2.2樣品處理與測定取血清0.5 mL，加入0.5 mol/L HCl溶液200 μL混勻,加乙醚5 mL旋渦混勻器萃取2 min， 3000 r/min離心10 min，取上清液3.5 mL于另一尖底試管中，40℃水浴中氮?dú)獯蹈桑?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣30 μL，按前述色譜條件測定乳酸左氧氟沙星的峰面積，以外標(biāo)法進(jìn)行定量.

1.2.3方法學(xué)考察與評價(jià)

1.2.3.1色譜條件色譜柱:Scienhome C18 ODS (ID 4.6 mm × 200 mm,填料粒度5 μm,德國 Kromasil)，流動(dòng)相:0.01 mol/L磷酸二氫鉀甲醇 0.5 mol/L四丁基溴化氨(78:22： 4, V/V/V),流速: 1 mL/min ，柱溫:40℃，檢測波長:294 nm.

1.2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取健康人混合血清0.5 mL 分別加入乳酸左氧氟沙星系列標(biāo)準(zhǔn)液，配成0.025, 0.125, 0.25, 0.5, 1.5, 3.0 mg/L的血清樣品，混勻，以下操作同樣品處理與測定項(xiàng)，以峰面積X對濃度C作線性回歸，得方程: C=0.002645X +2.782784 (r=0.9997)，乳酸左氧氟沙星在0.025～3.0 mg/L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好. 最低檢出濃度為0.01 mg/L.

1.2.3.3精密度和回收率用不同濃度的乳酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)液加健康人混合血清配成0.125, 0.5和3.0 mg/L的血清樣品，每個(gè)濃度各5份，按樣品制備項(xiàng)下處理測定（表1)，提示回收率符合要求. 用不同濃度乳酸左氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)液加健康人混合血清配成0.05, 0.5和1.5 mg/L的血清樣品，按樣品制備項(xiàng)下，于1 d內(nèi)處理測定 5次，另按上述操作，每日處理測定1次，連續(xù)5 d，得日內(nèi)和日間相對標(biāo)準(zhǔn)差(表2),提示方法精密度符合要求.表1血清中乳酸左氧氟沙星的回收率表2方法精密度

1.2.3.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析志愿者的血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)，用“生物利用度和等效性統(tǒng)計(jì)軟件”求算有關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù). AUC按梯形面積法計(jì)算，時(shí)間范圍取0～24 h. 相對生物利用度分別由受試制劑與參比制劑的AUC(0-t)和AUC(0-∞)相比而得. 計(jì)算公式為：F1=［ AUC(0-t) (受試制劑)/AUC(0-t) (參比制劑)］× 100%；F2=［AUC(0-∞)(受試制劑)/AUC(0-∞)(參比制劑)］× 100%.

結(jié)果

藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)兩種片劑的有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及生物等效性見表3，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，兩者之間的差異無顯著性意義（P>0.05）. 本研究過程中無嚴(yán)重不良反應(yīng)事件發(fā)生，也未發(fā)現(xiàn)與藥物有關(guān)的不良反應(yīng)事件.表3乳酸左氧氟沙星的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及相對生物利用度

討論

本實(shí)驗(yàn)使用反相高效液相法測定血清中的乳酸左氧氟沙星濃度，其流動(dòng)相的配制及血樣的提取方法均較為簡單、經(jīng)濟(jì)，回收率較高，峰形尖銳，血清中雜質(zhì)峰對藥物峰無干擾.

本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換和不轉(zhuǎn)換后使用雙單側(cè)檢驗(yàn)法，檢驗(yàn)對照藥品和受試藥品的等效性和置信區(qū)間，檢驗(yàn)所得結(jié)果一致. 相對生物利用度為F1=0.9998，F(xiàn)2=0.9917兩種片劑的兩組參數(shù)中Cmax, tmax, AUC(024 h), AUCinf均經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn),其差異無顯著性,即兩種制劑生物等效.