分光光度法的技術(shù)是生化檢驗必不可少的一項知識點(diǎn)，檢驗人員都應(yīng)該了解的，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理了相關(guān)內(nèi)容，希望能夠幫到大家。

設(shè)計得當(dāng)可用于各種酶的測定是一些可用于分光光度法的氧化還原物質(zhì)特性。

分光光度法的技術(shù)原理：利用NAD（P）H和NAD（P）吸收光譜差異建立的測酶活性濃度方法。NAD（P）H在340nm處有一吸收峰，而NAD（P）在此波段卻毫無吸光性。因此建立了一類和原來比色法截然不同方法。醫(yī)/學(xué)教育網(wǎng)搜集整理不需停止酶反應(yīng)，在340nm根據(jù)吸光度變化，就可觀察到酶反應(yīng)變化全過程。

此外，還可利用黃素單核苷酸（FMN）和黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）來測定各種含這二個輔基的酶。它們的氧化型在450nm有一很強(qiáng)吸收峰，而還原型的吸光度很低，同樣細(xì)胞色素還原型在可見光有一個非常明顯和很窄的吸收峰，都使人們很容易用分光光度法研究這些酶的作用。上述物質(zhì)主要用于氧化還原酶的測定。

科學(xué)家還設(shè)計出一系列人工合成酶的底物，用于其它酶的分光光度法測定。例如合成了很多對硝基酚的衍生物，用于各種水解酶的測定。堿性磷酸酶底物磷酸對硝基酚就是一個成功例子。又如測芳香基硫酸酯酶，可使用人工合成的硫酸對硝基酚為底物，其分解產(chǎn)物的吸收峰由原來的278nm變?yōu)?18nm，Webb成功地在330nm進(jìn)行此酶監(jiān)測。

分光光度法的上述原理還可以用于其它酶的測定，如烯醇化酶、延胡索酸水解酶的底物由于含不飽和鍵，在330nm處有很強(qiáng)吸收峰，而酶作用產(chǎn)物無此不飽和鍵。則不難在330nm處對這些酶進(jìn)行直接測定。

此后在分光光度法的發(fā)展過程中又導(dǎo)入了酶偶聯(lián)技術(shù)。使得分光光度法幾乎能測定所有的酶。因此臨床實驗室工作者如不能很好掌握分光光度法的技術(shù)，不了解各種影響因素，要作好酶的測定是很困難的。