除去雜抗體的兩種方法:
1.親和層析法
將交叉雜抗原交聯(lián)到瓊脂糖珠4B上醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理,如除去抗白蛋白抗體,則交聯(lián)上白蛋白或不含甲胎蛋白的血清,裝柱后,將預(yù)吸收的抗體通過親和層析柱,雜抗體吸附在柱上,流出液則是單價特異性抗體。
2.吸附劑方法
用不含特異性抗原的抗原液,即不含用于免疫動物抗原的其他雜抗原液,如血清、組織液或已知的某種雜抗原,用雙功能試劑將其交聯(lián),做成固相吸附劑。如用不含甲胎蛋白的血清,稀釋1倍后,加入0.25%的戊二醛或丙酮醛,放冰箱一夜后,該血清成為膠凍狀,用力打碎(或用組織粉碎器),用緩沖液多次洗滌后,則成為顆粒狀的凝膠吸附劑。用這種吸附劑直接加到抗血清中(約1/10),抗原則與雜抗體結(jié)合,上清液則為無雜抗體的單價特異性抗體。有時因雜抗體太多,必須處理吸收兩次才能完全去除。吸附過的凝膠,用3mol/L硫氰酸鉀(或鈉)洗滌,洗脫掉雜抗體,可再繼續(xù)使用。
有時雜抗原較少,其他蛋白也少,加入戊二醛后不形成膠凍狀,此時可加入無關(guān)蛋白進行交聯(lián),如牛血清蛋白、兔血清、馬血清、卵白蛋白等。加入量以達到含總蛋白的2%~3%為宜。