凝集反應(yīng)知識(shí)總結(jié)是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)師考試輔導(dǎo)要涉及的知識(shí)點(diǎn)，為了方便考生記憶，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理知識(shí)總結(jié)如下，希望對(duì)考生復(fù)習(xí)有幫助！

一、凝集反應(yīng)的特點(diǎn)

細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，可出現(xiàn)肉眼可見的凝集（agglutination）現(xiàn)象。早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1900年Landsteriner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類血型，并于1930年獲得了諾貝爾獎(jiǎng)金。凝集試驗(yàn)靈敏度高，方法簡(jiǎn)便，迄今已成為通用的免疫學(xué)試驗(yàn)，廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。

凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩階段：

①抗原抗體的特異結(jié)合；

②出現(xiàn)可見的顆粒凝集。

通常，細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆?？乖趹乙褐袔踟?fù)電荷，周圍吸引一層與之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負(fù)離子層，構(gòu)成一個(gè)雙層離子云。在松散層內(nèi)界和外界之間的電位差形成Z電位。溶液中的離子強(qiáng)度愈大，Z電位也就愈大。Z電位使顆粒相互排斥。當(dāng)特異抗體與相應(yīng)抗原顆粒互補(bǔ)結(jié)合時(shí)，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的Z電位，而使顆粒聚集在一起。但當(dāng)抗體分子太少，不足以克服相當(dāng)厚度的離子云層時(shí)，則不能使顆粒聚集。因此在凝集反應(yīng)中，IgM類抗體的作用比IgG類抗體要大數(shù)百倍，所以IgG類抗體常出現(xiàn)不完全反應(yīng)，即不可見的抗原抗體反應(yīng)。這種抗體有時(shí)又稱不完全抗體。不完全的含義是：可與抗原牢固結(jié)合，但因其分子量較小，不能起到由橋聯(lián)作用而形成的可見凝集現(xiàn)象。在試驗(yàn)過程中，為促使凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)醫(yī)|學(xué)教育網(wǎng)搜集整理，可采取以下措施：增加蛋白質(zhì)或電解質(zhì)，降低溶液中離子強(qiáng)度以縮短顆粒間的距離；增加試液的粘滯度，如加入右旋糖酐或葡聚糖等；用胰酶或神經(jīng)氨酸酶處理，改變細(xì)胞的表面化學(xué)結(jié)構(gòu)；以離心方法克服顆粒間的排斥等。

凝集試驗(yàn)是一個(gè)定性的檢測(cè)方法，即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陽(yáng)性或陰性；也可以進(jìn)行半定量檢測(cè)，即將標(biāo)本作一系列對(duì)倍稀釋后進(jìn)行反應(yīng)，以出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度作為滴度。由于凝集反應(yīng)方法簡(jiǎn)便，敏感度高，因而在臨床檢驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)。

在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類。自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)和抗球蛋白參與的凝集試驗(yàn)是兩種特殊的凝集反應(yīng)。

二、直接凝集反應(yīng)

細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)中的抗原稱為凝集原，抗全稱為凝集素。常用的凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種。

（一）玻片凝集試驗(yàn)

玻片凝集試驗(yàn)為定性試驗(yàn)方法，一般用已知抗體作為診斷血清、與受檢顆粒抗原如菌液或紅細(xì)胞懸液各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)顆粒凝集的為陽(yáng)性反應(yīng)。此法簡(jiǎn)便、快速，適用于從病人標(biāo)本中分離得到的菌種的診斷或分型。玻片法還用于紅細(xì)胞ABO血型的鑒定。

（二）試管凝集試驗(yàn)

試管凝集試驗(yàn)為半定量試驗(yàn)方法，在微生物學(xué)檢驗(yàn)中常用已知細(xì)菌作為抗原液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋度作為血清中抗體的效價(jià)，亦稱為滴度。在試驗(yàn)中，由于電解質(zhì)濃度和pH不適當(dāng)?shù)仍?，可引起抗原的非特異性凝集，出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，因此必須設(shè)不加抗體的稀釋液作對(duì)照組醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

臨床上常用的直接試管凝集試驗(yàn)為肥達(dá)試驗(yàn)和外斐試驗(yàn)。在輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者的紅細(xì)胞和血清的交互配血試驗(yàn)。

三、間接凝集反應(yīng)

（一）間接凝集反應(yīng)類型

根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式，間接凝集反應(yīng)分為4類：

①正向間接凝集反應(yīng)；

②反向間接凝集反應(yīng)；

③間接凝集抑制反應(yīng)；

④協(xié)同凝集反應(yīng)。

可用作載體的顆粒很多，常用的為紅細(xì)胞、膠乳顆粒及明膠顆粒等。間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。

間接凝集反應(yīng)是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。

（二）間接血凝試驗(yàn)

血凝試驗(yàn)（hemagglutinationtest）是紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)的簡(jiǎn)稱。間接血凝試驗(yàn)是以紅細(xì)胞作為載體的間接凝集試驗(yàn)，在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用廣泛，以下簡(jiǎn)述其操作過程。

1、載體

紅細(xì)胞是大小均一的載體顆粒，最常用的為綿羊、家兔、雞的紅細(xì)胞及O型人紅細(xì)胞。新鮮紅細(xì)胞能吸附多糖類抗原，但吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力較差。致敏的新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間短，且易變脆、溶血和污染，只能使用2～3天。為此一般在致敏前先將紅細(xì)胞醛化，可長(zhǎng)期保存而不溶血。常用的醛類有甲醛、戊二醛、丙酮醛等。紅細(xì)胞經(jīng)醛化后體積略有增大，兩面突起呈圓盤狀。

醛化紅細(xì)胞具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)抗原或抗體的能力，血凝反應(yīng)的效果基本上與新鮮紅細(xì)胞相似。如用兩種不同醛類處理效果更佳。也可先用戊二醛，再用鞣酸處理。醛化紅細(xì)胞能耐60℃加熱，并可反復(fù)凍融不破碎，在4℃可保存3～6個(gè)月，在-20℃可保存一年以上。

2、致敏

致敏用的抗原或抗體要求純度高，并保持良好的免疫活性。用蛋白質(zhì)致敏紅細(xì)胞的方法有直接法和間接法。直接法只須在低pH，低離子濃度下，用醛化紅細(xì)胞直接吸附即可。間接法則需用偶聯(lián)劑將蛋白質(zhì)結(jié)合到紅細(xì)胞上。常用偶聯(lián)劑為雙偶氮聯(lián)苯胺（bidiazotizedbenzidine，BDB）和氯化鉻。前者通過共價(jià)鍵，后者通過金屬陽(yáng)離子靜電作用使蛋白質(zhì)與紅細(xì)胞表面結(jié)合而達(dá)到致敏的目的。

（三）膠乳凝集試驗(yàn)

膠乳凝集試驗(yàn)也是一種間接凝集試驗(yàn)，所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳，是一種直徑約為0.8μm大小的圓形顆粒，帶有負(fù)電荷，可物理性吸附蛋白分子，但這種結(jié)合牢固性差。也可制備成具有化學(xué)活性基團(tuán)的顆粒，如帶有羧基的羧化聚苯乙烯膠乳等，抗原或抗體以共價(jià)鍵交聯(lián)在膠乳表面?；瘜W(xué)交聯(lián)一般通過縮合劑碳化二亞胺將膠乳上的羧基與被交聯(lián)物上的氨基縮合在一起。這種用交聯(lián)致敏的膠乳試劑性能穩(wěn)定，保存期長(zhǎng)。

膠乳凝集試驗(yàn)分試管法與玻片法醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)|搜集整理。

試管法先將受檢標(biāo)本在試管中以緩沖液作倍比稀釋，然后加入致敏的膠乳試劑，反應(yīng)后觀察膠乳凝集結(jié)果。玻片法操作簡(jiǎn)便，一滴受檢標(biāo)本和一滴致敏的膠乳試劑在玻片上混勻后，連續(xù)搖動(dòng)2～3min即可觀察結(jié)果。出現(xiàn)凝集大顆粒的為陽(yáng)性反應(yīng)，保持均勻乳液狀為陰性反應(yīng)。

膠乳為人工合成的載體，因此其性能比生物來(lái)源的紅細(xì)胞穩(wěn)定，均一性好。但膠乳與蛋白質(zhì)的結(jié)合能力以及凝集性能不如紅細(xì)胞，因此作為間接凝集試驗(yàn)，膠乳試驗(yàn)的敏感度不及血凝試驗(yàn)。

（四）明膠凝集試驗(yàn)

將全病毒抗原及重組抗原吸附在粉紅色明膠顆粒上，來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗體。

間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。

（1）抗原的檢測(cè)：反向間接凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)病原體可溶性抗原，也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分。

（2）抗體的檢測(cè)：可用于檢測(cè)細(xì)菌、病毒和寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體，例如間接凝集試驗(yàn)或明膠顆粒凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體以診斷艾滋病、乳膠凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗溶血素O等。

（五）間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用

間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備等特點(diǎn)，而且能用于抗原或抗體的測(cè)定，因此在臨床檢驗(yàn)中廣為應(yīng)用。

（一）抗原的檢測(cè)

反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)病原體的可溶性抗原，也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分。間接凝集反應(yīng)的敏感度雖較沉淀反應(yīng)高，但低于新發(fā)展的各種標(biāo)記免疫測(cè)定。因此在微量抗原測(cè)定中其實(shí)用性取決于臨床的要求。例如測(cè)定尿液HGG的膠乳凝集妊娠試驗(yàn)，直接凝集法的敏感度約為300mIU/ml，凝集抑制法的敏感度約為1000mIU/ml，停經(jīng)35～40天以上的孕婦可測(cè)得陽(yáng)性結(jié)果。檢測(cè)乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的間接血凝試驗(yàn)敏感度一般在2～5ng/ml，對(duì)獻(xiàn)血員的篩檢已不符合要求醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。

（二）抗體的檢測(cè)

可用于檢測(cè)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染后產(chǎn)生的抗體，例如間接血凝試驗(yàn)或明膠顆粒凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗人免疫缺陷病毒（HIV）抗體以診斷艾滋病、膠乳凝集試驗(yàn)用于檢測(cè)抗溶血素O等。也有用于檢測(cè)自身免疫性疾病的抗體，例如類風(fēng)濕因子膠乳凝集試驗(yàn)、抗DNA抗體和抗甲狀腺球蛋白抗體的間接血凝試驗(yàn)等。