酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測抗體方法是什么?
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1.間接法
最常用的方法,屬非競爭性結(jié)合試驗。原理:將抗原包被在固相載體上,加入待測樣本形成固相抗原-受檢抗體復(fù)合物;經(jīng)溫育洗滌后,加入酶標(biāo)二抗,常用羊抗人IgG,在固相上即形成固相抗原-待測抗體-酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物,加入底物后根據(jù)顯色的深淺確定待測抗體含量。多用于檢測IgG類型抗體。
2.雙抗原夾心法
此法可檢測各類抗體,因此雙抗原夾心法的靈敏度和特異性要高于間接法。其原理及操作步驟類似雙抗體夾心法,也可采用一步法。由于機(jī)體產(chǎn)生抗體IgG的效價有限,一般不會出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。
臨床上乙型肝炎表面抗體的測定常用此法。
3.競爭法
一般抗體檢測是較少采用,當(dāng)相應(yīng)抗原材料中含有與抗人IgG反應(yīng)的物質(zhì),而且不易得到足夠的純化抗原或抗原的結(jié)合特異性不穩(wěn)定時,可采用這種方法測定抗體,目前臨床運(yùn)用較多的是乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)的檢測。
競爭抗體與待測抗體的特異性及親和力越接近,則測定的可靠性越強(qiáng)。
4.捕獲法又稱反向間接法
主要用于血清中某種抗體亞型成分(如IgM)的測定,最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。原理:先將針對IgM的二抗包被于固相載體,加入待測標(biāo)本,其中IgM類抗體可被固相抗體捕獲,再加入特異性抗原,其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后,加入酶標(biāo)記特異性抗原的抗體,形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物,加底物顯色后,即可對待測標(biāo)本中IgM是否存在及含量進(jìn)行測定。
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