對(duì)流免疫電泳是臨床檢驗(yàn)主管技師考試《臨床免疫學(xué)》要求的考點(diǎn)，為方便考生復(fù)習(xí)，醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)對(duì)對(duì)流免疫電泳知識(shí)點(diǎn)做了整理，希望對(duì)大家復(fù)習(xí)有所幫助。  

原理：

在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動(dòng)慢，受電滲作用的影響也大，醫(yī)學(xué)/教育網(wǎng)往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時(shí)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動(dòng)快，雖然由于電滲作用泳動(dòng)速度減慢，但仍能向正極泳動(dòng)。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時(shí)，兩種成分相對(duì)泳動(dòng)，一定時(shí)間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢姷某恋砭€。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動(dòng)，因而加速了反應(yīng)的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時(shí)，抗原抗體向四周自由擴(kuò)散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時(shí)間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測(cè)定。

操作方法：

1.制瓊脂板以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%～1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm～3mm.

2.打孔瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對(duì)的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm～0.6cm，孔距0.4cm～1.0cm.挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。

3.加樣一對(duì)孔中，一孔加已知（或待測(cè)）抗原，另一孔加待測(cè)（或已知）抗體。

4.電泳將抗原孔置于負(fù)極端。電壓2.5V/cm～6V/cm，或電流強(qiáng)度3mA/cm～5mA/cm，電泳時(shí)間30min～90min.

觀察結(jié)果：

斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。醫(yī)學(xué)教/育網(wǎng)如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37℃數(shù)小時(shí)或置電泳槽過夜再觀察。

注意事項(xiàng)：

1.特異性對(duì)照鑒定為了排除假陽性反應(yīng)，則在待檢抗原孔的鄰近并列一陽性抗原孔，若待檢樣品中的抗原與抗體所形成的沉淀線和陽性抗原抗體沉淀線完全融合時(shí)，則待檢樣品中所含的抗原為特異性抗原。

2.當(dāng)抗原抗體在同一介質(zhì)中帶同樣電荷或遷徙相近時(shí)，則電泳時(shí)兩者向著一個(gè)方向泳動(dòng)。故不能用對(duì)流免疫電泳來檢查。

3.適當(dāng)?shù)碾姖B作用在對(duì)流免疫電泳中是必要的。當(dāng)瓊脂質(zhì)量差時(shí)，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負(fù)極，造成非特異性反應(yīng)。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對(duì)流免疫電泳。

4.抗原抗體濃度的比例當(dāng)抗原抗體比例不適合時(shí)，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。所以除了應(yīng)用高效價(jià)的血清外，每份待測(cè)樣品均可做幾個(gè)不同的稀釋度來進(jìn)行檢查。

以上就是醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)系我變?yōu)榇蠹艺淼膶?duì)流免疫電泳相關(guān)內(nèi)容，更多考試資料和考試資訊請(qǐng)登錄醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)。