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藥劑學(xué):胰島素的提取與制備

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今天小編帶大家看看胰島素的提取與制備。

胰島素的人工合成是科研領(lǐng)域內(nèi)一項(xiàng)重大成就。目前在生產(chǎn)中系用家畜(牛、羊、豬)或魚(yú)類(lèi)之新鮮胰臟以酸性乙醇破壞其胰酶后自胰島中獲得的一種胰腺內(nèi)分泌物。 醫(yī)學(xué)教。育網(wǎng)搜集整理

胰島素的性質(zhì)如下:

胰島素為白色或類(lèi)白色無(wú)定形粉末,易溶于稀酸或稀堿水溶液中,也易溶于酸性(或堿性)稀醇(80%以下)和稀丙酮水溶液中,在其他無(wú)水有機(jī)溶媒中均不溶。在酸性溶液中(如pH3.5)較穩(wěn)定,在堿性溶液中極易失活性,其他凡能改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的因素如加熱(800c以上)、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和蛋白酶等都可使胰島素受到破壞。

胰島索是一種分子量較小的蛋白質(zhì)激素,其基本結(jié)構(gòu)單位(單體)分子量近6000,其二聚體分子量為12,000,由四個(gè)多肽鍵鏈以六個(gè)二硫鍵相連結(jié)而成。其中含胱氨酸約占12%,胰島素的生理效能與此種氨基酸中二硫鍵有著極密切的關(guān)系,任何一個(gè)二硫鍵斷裂都能使胰島素失去活力。

因胰島素屬于蛋白質(zhì),所以它具有一般蛋白質(zhì)性質(zhì)。近數(shù)十年來(lái)國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)胰島素的方法主要有兩種:一是“減壓濃縮法”;另一種是“乙醚沉淀法”,即是將酸性乙醇提取液經(jīng)過(guò)初步提純后用大量乙醚將胰島素沉淀下來(lái),然后制成纖維狀胰島素再精制成結(jié)晶。由于以上兩種方法均不甚理想。近年來(lái)又在探索新的制備方法,其中以“海藻酸吸附法”較為成熟,我國(guó)亦試制成功,但用于工業(yè)生產(chǎn)上,還須進(jìn)一步改進(jìn)。在實(shí)際生產(chǎn)中,中國(guó)目前仍用“減壓濃縮法”,現(xiàn)將“減壓濃縮法”生產(chǎn)胰島索介紹如下:

提取粗制品:

將新鮮或冰凍豬胰(牛胰更好)除去結(jié)締組織等雜質(zhì),絞碎成冰胰漿。稱(chēng)重量置提取罐中,加入1.5~2.0倍量的酸性酒精溶液,使PH為2.5~3.0,醇含量為70%左右,在溫度為13~150C攪拌提取3h,壓濾,使浸液盡量濾出。殘?jiān)儆蒙戏ㄌ崛∫淮巍?醫(yī)。學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

合并二次浸出液,放堿化罐中,在10~150C下加入氨水,使pH達(dá)8.2~8,4,拌攪35/min立即壓濾,于澄清的濾液中迅速加入24mol/L硫酸使pH調(diào)至2.5~3.0.在0℃左右放置過(guò)夜使酸性雜蛋白沉降,分取清液,真空濃縮(300C以下),使?jié)饪s液量到原體積1/7~1/9,將濃縮液在10min之內(nèi)迅速加溫至500G立即用冰冷卻至00C,放置3h,將上層脂肪分離(回收胰島素),澄清的濃縮液,調(diào)pH達(dá)2.5,在20~250C下攪拌加入溶液容積25%的精鹽,使全部溶解,置冷處放置3~4h沉淀,用絹布濾集沉淀,再用無(wú)水丙酮洗滌數(shù)次(除去剩余的脂肪和水),300C以下真空干燥得粗制品。

精制:

稱(chēng)取粗制品用pH2.2的7~10倍量的酸水溶解,加30%(按酸水容積)冷丙酮,用5mol/LNH 40H調(diào)至pH 4.2,再補(bǔ)加所用氨水量的30%冷丙酮。在5℃以下放置過(guò)夜,抽濾,沉淀留用回收胰島素。取濾液用5mol/LNH4OH調(diào)至pH 6.2~6.4,加入20氯化鋅(ZnC12),如pH變偏酸再調(diào)至pH6.0,在冰箱中放置過(guò)夜,抽濾,濾液口收胰島素。濾餅稱(chēng)重,每克干物約用50ml 20% 枸椽酸溶解。加入固體ZnC12 0.O8g,加丙酮16m1,攪拌均勻,補(bǔ)加水至100 m1,調(diào)pH 6.0~6.2,放冰箱中48 h以上析出結(jié)晶,過(guò)濾,濾餅收取;濾出母液按上條件,在冰箱中放置2~3d,尚可收口部分結(jié)晶。取結(jié)晶,用丙酮洗2次,乙醚洗1次,置P205的真空干燥中干燥,即得成品,測(cè)定生物效價(jià)。

制劑:

胰島素口服能受胃腸消化酶分解而失效,因而必須制成注射液:有胰島素注射液、蛋白鋅胰島素注射液、精蛋白鋅胰島素注射液等。

使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí),影響精度的因素較多,故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品,如維生素A測(cè)定法,則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。

希望對(duì)你有幫助!

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主講老師:劉 楝老師

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