平板劃線分離法是接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的。

（1）倒平板溶化牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒平板，水平靜置待凝。

（2）在酒精燈光焰上灼燒接種環(huán)，待冷，取一接種環(huán)金黃葡萄球菌、大腸桿菌混合菌液。

（3）左手握瓊脂平板稍抬起皿蓋，同時靠近火焰周圍，右手持接種環(huán)伸入皿內(nèi)，在平板上一個區(qū)域作之形回劃線，劃線時例接種環(huán)與平板表面成30-40°角度輕輕接觸，以腕力在表面作輕快的滑動，勿使平板表面劃破或嵌進增基內(nèi)。

（4）灼燒接種杯，以殺滅接種環(huán)上尚殘余的菌液醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理，待冷卻后，再將接種環(huán)伸入皿內(nèi)，在第一區(qū)域劃過線的地方稍接觸一下后，轉(zhuǎn)動90°，在第二區(qū)域繼續(xù)劃線。

（5）劃畢后再灼燒接種杯，冷卻后用同樣方法在其他區(qū)域劃線。

（6）全部劃線完畢后，在平皿底用特種蠟筆注明菌種、日期、組別、姓名。將整個培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱。

（7）37℃經(jīng)過24-48小時培養(yǎng)后取出觀察。注意菌落的開關、大小、顏色、邊緣、表面結構、透明度等性狀。