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紫外可見分光光度法

2009-03-27 10:32 醫(yī)學教育網(wǎng)
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  一、基本原理

  紫外--可見分光光度法:是根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好。波長長(頻率小)的光線能量小,波長短(頻率大)的光線能量大。 100nm、200nm、400nm、800nm、400um、1m通指X-射線、紫外區(qū)、可見區(qū)、紅外區(qū)、微波區(qū)、無線電波區(qū)

  Beer-lambert定律: A=Elc

  A--吸收度

  E-吸收系數(shù)

  l ---液層厚度

  c---溶液濃度吸收度濃度與厚度的關系。是吸收光度法的基本定律,重要前提是單色光。

  摩爾吸收系數(shù):指在一定波長下,溶液濃度為1mol/L , 厚度為1cm時的吸收度,用 表示。

  百分吸收系數(shù):指在一定波長下,溶液濃度為1%(W/V) , 厚度為1cm時的吸收度,用 表示。

  影響B(tài)eer定律因素:化學因素,光學因素

  二、紫外--可見分光光度計:

  主要部件:

  1、 光源:要求光譜的光源,

  2、 氫燈和鎢燈(350nm)

  3、 單色器:進口狹縫、準直鏡、色散元件(棱鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。

  4、 吸收池:用光學玻璃制成的吸收池,

  5、 只能用于可見光區(qū)。用熔融石英(氧化硅),

  6、 可見紫外光區(qū)。

  7、 檢測器:光電池:(硒光電池:用于可見光;硅光電池:紫外可見光) 內(nèi)阻小,光電管:內(nèi)阻高,電流易放大 。

  8、 易疲勞。

  9、 訊號處理和顯示器

  三、定性與定量方法:

  (一)、定性鑒別:是多數(shù)有機化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。

  1、對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)

  2、對比吸收度(或吸收系數(shù))比值

  3、對比吸收光譜的一致性

  (二)、純度檢查:雜質(zhì)檢查與雜質(zhì)限量檢測

  (三)、含量測定:

  1、吸收系數(shù)法

  2、標準曲線法

  3、對照法

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