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主管藥師輔導(dǎo):基礎(chǔ)知識藥分光譜分析法(1)

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   光譜分析法

  一、紫外—可見分光光度法

  (一)特點(diǎn)

  靈敏度高,可達(dá)10-4g/ml~10-7g/ml;準(zhǔn)確度高,相對誤差為2%~5%;儀器價格較低廉,操作簡單,易于普及;應(yīng)用廣泛,許多化合物可以,同時應(yīng)用計算分光光度法不經(jīng)分離而直接測定混合物中各組分的含量。

  (二)基本原理

  波長200~400nm范圍稱為紫外光區(qū),400~760nm稱為可見光區(qū)。物質(zhì)吸收紫外和可見光區(qū)電磁波而產(chǎn)生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜。 (醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理)

  Lambert-Beer定律 A=ECL

  A為吸收度,E為吸收系數(shù),C為被測物質(zhì)溶液濃度,L為光路長度。吸收系數(shù)E是物質(zhì)的物理常數(shù),隨濃度C單位的不同有不同表示方法。藥品檢驗中使用百分吸收系數(shù) ,物理意義是當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%(1g/100ml),液層厚度為1cm時的吸收度。

  (三)可見-紫外分光光度計

  光源-單色器-吸收池-檢測器-數(shù)據(jù)記錄和處理

  1.光源:紫外光區(qū)通常采用氫燈或氘燈,可見光區(qū)采用鎢燈。

  2.吸收池:玻璃池適用于370nm以上的可見光區(qū),石英池適用于紫外、可見光區(qū),通常僅在紫外光區(qū)使用。

  (四)紫外吸收光譜與物質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)系

  紫外—可見吸收光譜屬分子吸收光譜,是由分子的外層價電子躍遷產(chǎn)生的,也稱電子光譜。它與原子光譜的窄吸收帶不同。每種電子能級的躍遷會伴隨若干振動和轉(zhuǎn)動能級的躍遷,使分子光譜呈現(xiàn)比原子光譜復(fù)雜得多的寬帶吸收。

  當(dāng)分子吸收紫外—可見區(qū)的輻射后,產(chǎn)生價電子躍遷。這種躍遷有三種形式:

  (1)形成單鍵的σ電子躍遷。

  (2)形成雙鍵的π電子躍遷。

  (3)未成鍵的n電子躍遷。

  (五)吸收度的測定方法

  1.對溶劑的要求:能充分溶解樣品,與樣品無相互作用,揮發(fā)性小,在測定波長處的吸收要符合要求。

  2.空白對照實驗:將配制溶液用溶劑(空白溶液)裝入?yún)⒈瘸乩?,調(diào)節(jié)儀器,使吸收度為0,去除溶劑和容器吸收、光散射。反射的影響。

  3.測定波長確證:為提高測定方法靈敏度,減少測定誤差,吸收度一般在λmax處測定。

  4.供試品溶液濃度:使吸收度在0.3~0.7范圍內(nèi)。

  5.儀器的狹縫寬度:以減少狹縫寬度時,供試品溶液吸收度不再增加為準(zhǔn)。

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