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人類免疫缺陷病毒生物學(xué)診斷

2014-02-18 16:53 來源:
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(一)形態(tài)結(jié)構(gòu)

病毒呈球形,直徑100~120nm,電鏡下可見一致密的圓錐狀核心,內(nèi)含病毒RNA分子和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶),病毒外層囊膜系雙層脂質(zhì)蛋白膜,其中嵌有g(shù)p120和gp41,分別組成刺突和跨膜蛋白。囊膜內(nèi)面為P17蛋白構(gòu)成的衣殼,其內(nèi)有核心蛋白(P24)包裹RNA(圖30-1)。

(二)基因結(jié)構(gòu)及編碼蛋白的功能

HIV基因組長(zhǎng)約9.2~9.7kb,含gag、Pol、env、3個(gè)結(jié)構(gòu)基因,及至少6個(gè)調(diào)控基因(Tat Rev、Nef、Vif、VPU、Vpr)并在基因組的5′端和3′端各含長(zhǎng)末端序列(圖30-2)。HIVLTR含順式調(diào)控序列,它們控制前病毒基因的表達(dá)。已證明在LTR有啟動(dòng)子和增強(qiáng)子并含負(fù)調(diào)控區(qū)。

1.gag基因能編碼約500個(gè)氨基酸組成的聚合前體蛋白(P55),經(jīng)蛋白酶水解形成P17,P24核蛋白,使RNA不受外界核酸酶破壞。

2.Pol基因編碼聚合酶前體蛋白(P34),經(jīng)切割形成蛋白酶、整合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、核糖核酸酶H,均為病毒增殖所必需。

3.env基因編碼約863個(gè)氨基酸的前體蛋白并糖基化成gp160,gp120和gp41.gp120含有中和抗原決定簇,已證明HIV中和抗原表位,在gp120 V3環(huán)上,V3環(huán)區(qū)是囊膜蛋白的重要功能區(qū),在病毒與細(xì)胞融合中起重要作用。gp120與跨膜蛋白gp41以非共價(jià)鍵相連。gp41與靶細(xì)胞融合,促使病毒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。實(shí)驗(yàn)表明gp41亦有較強(qiáng)抗原性,能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體反應(yīng)。

4.TaT 基因編碼蛋白(P14)可與LTR結(jié)合,以增加病毒所有基因轉(zhuǎn)錄率,也能在轉(zhuǎn)錄后促進(jìn)病毒mRNA的翻譯。

5.Rev基因產(chǎn)物是一種順式激活因子,能對(duì)env和gag中順式作用抑制序(Cis-Actingrepression sequance,Crs) 去抑制作用,增強(qiáng)gag和env基因的表達(dá),以合成相應(yīng)的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。

6.Nef基因編碼蛋白P27對(duì)HIV基因的表達(dá)有負(fù)調(diào)控作用,以推遲病毒復(fù)制。該蛋白作用于HIv cDNA的LTR,抑制整合的病毒轉(zhuǎn)錄??赡苁荋IV在體內(nèi)維持持續(xù)感集體所必需。

7.Vif基因?qū)IV并非必不可少,但可能影響游離HIV感染性、病毒體的產(chǎn)生和體內(nèi)傳播。

8.VPU基因?yàn)镠IV-1所特有,對(duì)HIV的有效復(fù)制及病毒體的裝配與成熟不可少。

9.Vpr基因編碼蛋白是一種弱的轉(zhuǎn)錄激活物,在體內(nèi)繁殖周期中起一定作用。

HIV-2基因結(jié)構(gòu)與HIV-1有差別:它不含VPU基因,但有一功能不明VPX基因。核酸雜交法檢查HIV-1與HIV-2的核苷酸序列,僅40%相同。env基因表達(dá)產(chǎn)物激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的抗體無交叉反應(yīng)。

(三)培養(yǎng)特性

將病人自身外周或骨髓中淋巴細(xì)胞經(jīng)PHA刺激48~72小時(shí)作體外培養(yǎng)(培養(yǎng)液中加IL2)1~2周后,病毒增殖可釋放至細(xì)胞外,并使細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞,最后細(xì)胞破潰死亡。亦可用傳代淋巴細(xì)胞系如HT-H9、Molt-4細(xì)胞作分離及傳代。醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理

HIV動(dòng)物感染范圍窄,僅黑猩猩和長(zhǎng)劈猿,一般多用黑猩猩做實(shí)驗(yàn)。用感染HIV細(xì)胞或無細(xì)胞的HIV濾液感染黑猩猩,或?qū)⒏腥綡IV黑猩猩血液輸給正常黑猩猩都感染成功,邊續(xù)8個(gè)月在血液和淋巴液中可持續(xù)分離到HIV,在3~5周后查出HIV特異性抗體,并繼續(xù)維持一定水平。但無論黑猩猩或長(zhǎng)臂猿感染后都不發(fā)生疾病。

(四)抵抗力

HIV對(duì)熱敏感。56℃30min滅活,但在室溫保存7天,仍保持活性。不加穩(wěn)定劑病毒-70℃冰凍失去活性,而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰凍3個(gè)月仍保持活性。對(duì)消毒劑和去污劑亦敏感,0.2%次氯酸鈉0.1%漂白粉,70%乙醇,35%異丙醇、50%乙醚、0.3%H2O20.5%來蘇爾處理5′能滅活病毒,1%NP-40和0.5%triton-X-100能滅活病毒而保留抗原性。外紫外線、γ射線有較強(qiáng)抵抗力。

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