自動生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾物、混合、恒溫反應(yīng)、自動監(jiān)測、數(shù)據(jù)處理以及實(shí)驗(yàn)后清洗等步驟進(jìn)行自動化操作的儀器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已經(jīng)成為醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床診斷所必可不少的儀器之一。它的應(yīng)用大大提高了生化檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性、精密度和工作效率，適應(yīng)了臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展對檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的要求，然而這一切不僅需要生化分析儀的技術(shù)基礎(chǔ)，也需要儀器內(nèi)每個項(xiàng)目都有一組最優(yōu)化的分析參數(shù)。并且目前大多數(shù)生化分析儀為開放式，封閉式的儀器一般也會另外留一些檢測項(xiàng)目的空白通道由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)，因此我們有必要了解生化分析儀各個分析參數(shù)的基本含義以及設(shè)置方法。

1.試驗(yàn)名稱常以項(xiàng)目的英文縮寫來設(shè)置，如總蛋白設(shè)置為TP，白蛋白設(shè)置為ALB等。

2.方法類型生化分析儀常用的方法有終點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測法、比濁法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測原理等選擇其中一種分析方法。

3.反應(yīng)溫度自動生化分析儀通過溫度控制系統(tǒng)保持溫度恒定，以保證反應(yīng)的正常進(jìn)行，其保持恒溫的方式有三種：干式恒溫器加熱、水浴式循環(huán)加熱、恒溫器循環(huán)間接加熱。恒溫控制器可以對25℃、30℃、37℃三種溫度進(jìn)行恒溫，根據(jù)需要可以任意選擇，半自動生化分析儀恒溫器屬于這種。全自動生化分析儀的溫度控制器一般只能控制37℃一種溫度，少數(shù)也可以控制30℃和37℃兩種溫度。

4.反應(yīng)波長當(dāng)測定體系中只有一種組分或混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收波長無重疊時，可選用單波長，如果待測物質(zhì)有幾個吸收峰，可選用吸光度最大的一個波長，或者選擇在吸收峰處吸光度隨波長變化較小的某個波長。當(dāng)被檢溶液混濁或存在較多的干擾物質(zhì)時，測定過程中會出現(xiàn)光散射和非特異性光吸收，從而影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，此時可用雙波長甚至多波長測定，以提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，而在實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。由于脂質(zhì)、血紅蛋白、膽紅素在較寬的波長范圍內(nèi)有較強(qiáng)的光吸收，常常同測定波長有重疊，此時測得的吸光度包含待測物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度，因此必須選用合適的輔助波長來消除干擾物質(zhì)的吸光度。輔助波長的設(shè)置原則是根據(jù)測定波長選擇輔助波長，要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。

5.反應(yīng)方向有正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)兩種，反應(yīng)過程中吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。

6.樣品量與試劑量樣品與試劑量的確定一般按照試劑說明書上的比例，并結(jié)合儀器的特性進(jìn)行設(shè)置，亦可根據(jù)手工法按比例縮減或重新設(shè)計(jì)，但要考慮到檢測靈敏度、線性范圍，盡可能將樣品稀釋倍數(shù)大些，以降低樣品中其他成分的影響。在樣品與試劑量的設(shè)置過程中主要應(yīng)注意以下幾個方面：①稀釋水量，添加樣品稀釋水的是為了洗出粘附在采樣針內(nèi)壁上的微量血清，減少加樣誤差，添加試劑稀釋水是為了避免試劑間的交叉污染，兩種稀釋水的量應(yīng)在復(fù)溶試劑時按比例扣除。如果采用液體試劑盒時因不再用水，無法扣除稀釋水量，所以兩種稀釋水應(yīng)盡量減少，以免試劑被過量稀釋。②最小樣品量，即分析儀進(jìn)樣針能在規(guī)定的誤差范圍內(nèi)吸取的最小樣品量，隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，儀器的最小樣品量逐漸減小，目前有少至1.6μl的。在樣品含高濃度代謝產(chǎn)物或高活性酶濃度的情況下往往需采用分析儀的最小樣品量作為減量參數(shù)，從而使儀器的檢測范圍上限得以擴(kuò)大。③總反應(yīng)容量，在不同的分析儀有一個不同的規(guī)定范圍，在設(shè)置的時候樣品量和試劑量之和不能超過這一范圍。該值受儀器的光路系統(tǒng)所影響，直射式光路由于光束較寬，難于減少所測試反應(yīng)液體積，集束式光路則是通過一個透鏡使光束變窄，可檢測低至180μl的反應(yīng)液混合體，近年來又出現(xiàn)了點(diǎn)光源技術(shù)，它的光束更小，照射到樣品杯時僅為一個點(diǎn)，可使反應(yīng)液的量降至120μl.④試劑量/樣品量比值，不要為節(jié)省試劑而過分地減少試劑用量，因?yàn)樵诮K點(diǎn)比色法中，縮小試劑量/樣品量比值會降低線性范圍，遇高濃度樣本會因試劑量不足而使結(jié)果偏低。

7.分析時間分析時間包括孵育時間、延遲時間、監(jiān)測時間等，選擇不同的分析方法應(yīng)選擇相應(yīng)的分析時間。

8.計(jì)算因子（F值）和實(shí)測F值用連續(xù)監(jiān)測法進(jìn)行酶活性測定時，不需作標(biāo)準(zhǔn)管或標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)摩爾吸光系數(shù)很容易進(jìn)行酶活性濃度的計(jì)算。先測定在線性范圍內(nèi)每分鐘吸光度的變化（ΔA/min），以U/L代表酶活性濃度時，則可按下式進(jìn)行計(jì)算：

U/L，t℃=△A/min×F==△A/min×V×106/（ε×V×L）

式中V：反應(yīng)體系總體積（ml）；106：將mol換算成μmol；ε：摩爾吸光系數(shù)（cm2/mol）；v：樣品體積（ml）；L：比色杯光徑（cm）。當(dāng)條件固定時，從理論上講V、v和L均為固定值，ε值為常數(shù)，所以F值是恒定的。F值對酶的測定十分重要，過高雖然測定的線性較寬，但重復(fù)性差，反之精密度雖好，但檢測線性窄，因此應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行合理的設(shè)置和應(yīng)用。但是在臨床實(shí)際工作中，儀器諸多因素如波長的準(zhǔn)確性、半波寬的大小、比色杯光徑及磨損與清潔度、溫控的準(zhǔn)確性、加樣系統(tǒng)狀況等若不符合要求或發(fā)生變化都會影響指示物的ε值或上述公式中的相關(guān)項(xiàng)，因此應(yīng)在具體儀器條件下，定期檢查和實(shí)際測定指示物的實(shí)測ε值和F值。因?yàn)榧僋AD（P）H溶液不穩(wěn)定，所以NAD（P）H的ε值需用葡萄糖己糖激酶法實(shí)測，實(shí)際操作為將某一濃度的葡萄糖溶液重復(fù)5-10次測定，得到相應(yīng)的一組吸光度A值，求出Aˉ±s，注意s必須低于規(guī)定的批內(nèi)允許值，再根據(jù)下面兩個公式分別計(jì)算出NAD（P）H的實(shí)測ε值和F值。

9.線性度是非線性比率的界線，常用%表示，其計(jì)算公式為，式中：k1為連續(xù)監(jiān)測時間2/3內(nèi)前讀數(shù)時間的斜率，k2為后2/3讀數(shù)時間的斜率，k3為總的斜率，一般設(shè)置為15%.對一些酶活性項(xiàng)目，可以適當(dāng)放寬，當(dāng)不需要設(shè)置檢查界限時，設(shè)置其為0.線性百分?jǐn)?shù)大，說明Δk之間已不成線性；超過極限值說明底物不足，檢測結(jié)果會變低，應(yīng)稀釋后重測。

10.底物耗盡限額選擇連續(xù)監(jiān)測法或兩點(diǎn)終點(diǎn)法時設(shè)置，不同型號分析儀的設(shè)計(jì)不一樣，有的為零點(diǎn)與監(jiān)測第一點(diǎn)吸光度的差額，有的為吸光度上升或下降至指定吸光度（MAX-OD/MIN-OD）的數(shù)值。超過限額說明樣品的酶活性非常高，底物消耗太快，在儀器程序規(guī)定的線性反應(yīng)期內(nèi)吸光度的變化往往不代表真正的酶活力，導(dǎo)致結(jié)果偏低，該樣品應(yīng)稀釋一定的倍數(shù)重新測定。此參數(shù)對于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要，下面以丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶為例簡述設(shè)置MIN-OD的步驟，選擇一份高活性酶的混合血清，用生理鹽水稀釋，得到一組從低濃度至高濃度的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶溶液；把這一組溶液按儀器設(shè)定的程序進(jìn)行測定，并打印出反應(yīng)曲線；從曲線中可以發(fā)現(xiàn)當(dāng)酶活力達(dá)到一定臨界濃度時，該臨界濃度的反應(yīng)曲線在連續(xù)監(jiān)測時間內(nèi)成線性，但是在監(jiān)測時間后成非線性，即連續(xù)監(jiān)測時間的最后一個讀數(shù)點(diǎn)正好是線性與非線性的臨界點(diǎn)，所以該點(diǎn)的吸光度是在連續(xù)監(jiān)測時間內(nèi)酶促反應(yīng)沒有發(fā)生底物耗盡時所能達(dá)到的最小吸光度值，這個最小吸光度值也就是MIN-OD.當(dāng)酶活力高于上述臨界濃度時，反應(yīng)曲線在連續(xù)監(jiān)測期內(nèi)已不呈線性反應(yīng)，有些儀器自動選擇彈性速率功能，能自動選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測期內(nèi)仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果，使酶活性測定的線性范圍得以擴(kuò)大，可以減少稀釋及重測次數(shù)、降低成本。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

11.試劑吸光度上限、下限試劑吸光度上限為正向反應(yīng)用，可參考試劑盒說明書數(shù)值折算成所用比色杯的光徑。如試劑盒要求上限為0.4，比色杯光徑0.6cm，則試劑吸光度上限設(shè)置為0.24.試劑吸光度下限為負(fù)向反應(yīng)用，設(shè)置法同試劑吸光度上限。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示著該試劑的變質(zhì)，此時應(yīng)更換合格試劑。

12.線性范圍試劑盒的線性范圍與試劑質(zhì)量、反應(yīng)時試劑/樣品比有關(guān)，應(yīng)實(shí)測試劑盒的線性范圍。當(dāng)樣品濃度低于線性下限應(yīng)增加樣品量重測，而高于線性上限則應(yīng)稀釋后重測。使用任何一種方法測定某待測物時，待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過此范圍，儀器將顯示測定結(jié)果超過線性范圍的提示，多數(shù)分析儀會自動將樣品減量或增量重新測定。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)

13.校正方法儀器內(nèi)的設(shè)置的校正方法一般包含二點(diǎn)校正、多點(diǎn)校正、非線性校正等。二點(diǎn)校正是指用一個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和一個試劑空白進(jìn)行校正的方法，該法要求反應(yīng)必須符合朗伯-比爾定律，即標(biāo)準(zhǔn)曲線呈直線。多點(diǎn)校正是多個具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品用非線性法進(jìn)行校正，適用于標(biāo)準(zhǔn)曲線呈各種曲線形式的項(xiàng)目，如多數(shù)的免疫濁度法。非線性校正包括對數(shù)校正、指數(shù)校正、量程法校正等，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈對數(shù)或指數(shù)曲線特征的項(xiàng)目可選擇所對應(yīng)的方法校正，量程法則是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上每兩點(diǎn)間濃度與吸光度的關(guān)系計(jì)算待測物的濃度。

14.線性回歸方程用于校準(zhǔn)不同分析方法間測定結(jié)果的一致性，在定標(biāo)后即可求得，有斜率和截距兩個參數(shù)，a為曲線在縱軸上的截距，b為曲線的斜率。

此外還有項(xiàng)目代碼、小數(shù)點(diǎn)位數(shù)、計(jì)量單位、正常參考值等分析參數(shù)，均可按照實(shí)際情況進(jìn)行設(shè)置。恰當(dāng)設(shè)置各種分析參數(shù)是使用好生化分析儀最重要的部分之一，也是操作者能否正確控制儀器完成一系列復(fù)雜而有序的操作程序的關(guān)鍵，作為新世紀(jì)的檢驗(yàn)工作者，我們有必要掌握這些技術(shù)。