臨床化學(xué)檢驗(yàn)中的層析技術(shù)原理是什么呢？快來跟著小編了解一下吧！

（一）層析技術(shù)的原理

層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。

所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：

固定相：大多是固體物質(zhì)或是固定于固體上的成分。

流動(dòng)相：由水和各種溶媒組成（液體或氣體）。

當(dāng)待分離的混合物隨流動(dòng)相通過固定相時(shí)，由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量比）不同，且隨流動(dòng)相向前移動(dòng)，各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。

分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達(dá)到將各組分分離的目的。

（二）層析法分類

按層析原理還可將層析分為：凝膠層析、離子交換層析、高效液相層析、親和層析。

1.凝膠層析

又稱分子篩過濾或排阻層析等。

固定相是多孔凝膠，各組分的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度（移動(dòng)速度）也不同。

優(yōu)點(diǎn)：所用凝膠屬于惰性載體，吸附力弱，操作條件溫和，不需要有機(jī)溶劑，對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果。

常用的凝膠有Sephadex G（葡聚糖凝膠）系列。

凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等。

2.離子交換層析

采用具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆交換的性質(zhì)來分離離子型化合物的方法。

主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其他帶電荷的生物分子。

3.高效液相層析

在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進(jìn)氣相層析的理論而發(fā)展起來的一項(xiàng)新穎快速的分離技術(shù)。

具有分離能力強(qiáng)、測(cè)定靈敏度高、可在室溫下進(jìn)行、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤其有利。

根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性，高效液相色譜分析可分為正相和反相兩種。

4.親和層析

利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，從而達(dá)到分離的目的。

將可親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當(dāng)含混合組分的樣品通過此固定相時(shí)，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)才能被固定相吸附結(jié)合，無關(guān)組分隨流動(dòng)相流出。

改變流動(dòng)相組分，可將結(jié)合的親和物洗脫下來。

親和層析中所用的載體稱為基質(zhì)，與基質(zhì)共價(jià)連接的化合物稱配基。

具有專一親和力的生物分子對(duì)主要有：

抗原與抗體，DNA與互補(bǔ)DNA或RNA，酶與底物，激素與受體，維生素與特異結(jié)合蛋白，糖蛋白與植物凝集素等。

親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、分離核酸等。

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