生物素-親和素系統(tǒng)的應(yīng)用是什么呢
生物素-親和素系統(tǒng)的應(yīng)用是什么呢?快來(lái)跟著小編了解一下吧!
一、生物素-親和素系統(tǒng)基本類型及原理
(一)BAB法:也稱為橋聯(lián)親和素-標(biāo)記生物素法(BRAB),是以游離的親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯(lián)劑,將檢測(cè)反應(yīng)體系中抗原-生物素化抗體復(fù)合物與標(biāo)記生物素(如酶標(biāo)生物素)連接起來(lái)。
(二)ABC法:預(yù)先將親和素(或鏈霉親和素)與酶標(biāo)生物素結(jié)合,形成可溶性的親和素(或鏈霉親和素)-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC或SABC)。當(dāng)其與檢測(cè)反應(yīng)體系中的生物素化抗體(直接法)或生物素化第二抗體(間接法)相遇時(shí),ABC(或SABC)中未飽和的親和素(或鏈霉親和素)結(jié)合部位即可與抗體上的生物素結(jié)合,使抗原-抗體反應(yīng)體系與ABC(或SABC)標(biāo)記體系連成一體進(jìn)行檢測(cè)。
(三)BA法:BA(或LAB)法是以標(biāo)記親和素(或鏈霉親和素)直接與免疫復(fù)合物中的生物素化抗體連接進(jìn)行檢測(cè)。
二、生物素-親和素系統(tǒng)在酶免疫測(cè)定中的應(yīng)用
(一)將BAS與ELISA偶聯(lián)可提高ELISA的靈敏度:每個(gè)親和素可結(jié)合4個(gè)生物素,可使反應(yīng)明顯放大;親和素與生物素間極高的親和力,使反應(yīng)結(jié)合更牢固穩(wěn)定,而且特異性高;用小分子生物素代替酶標(biāo)記抗體,可減少反應(yīng)中的空間位阻。
(二)生物素-親和素系統(tǒng)可作為均相酶免疫測(cè)定中高效的酶活性調(diào)變系統(tǒng)。
三、生物素-親和素系統(tǒng)在熒光免疫技術(shù)中的應(yīng)用
通常采用BA法,即用熒光素直接標(biāo)記親和素(或鏈霉親和素);也可采用游離親和素(或鏈霉親和素)搭橋,兩端分別連接生物素化抗體和熒光素標(biāo)記的生物素(BAB法)或熒光標(biāo)記的抗親和素(或鏈霉親和素)抗體的夾心法。
四、生物素-親和素系統(tǒng)在放射免疫測(cè)定中的應(yīng)用
BAS主要與免疫放射分析(IRMA)檢測(cè)體系偶聯(lián),用于對(duì)終反應(yīng)的放大(BA法)。
此外,BAS也可用于IRMA反應(yīng)后B,F(xiàn)成分的分離。該法的優(yōu)點(diǎn)是克服了其他IRMA法需多次離心的麻煩,待測(cè)復(fù)合物與固相結(jié)合更牢固,操作更簡(jiǎn)便。
五、生物素-親和素系統(tǒng)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用
BAS在分子生物學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用主要集中在:
1.以生物素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行的定位檢測(cè)
2.用BAS制備的親和吸附劑進(jìn)行基因的分離純化
3.將免疫測(cè)定技術(shù)與PCR結(jié)合建立免疫-PCR用于抗原的檢測(cè)
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