放射性標(biāo)記物制備及鑒定
放射性標(biāo)記物制備及鑒定,快來跟著小編了解一下吧!
(一)原理:以放射性碘原子置換被標(biāo)記物分子中酪氨酸或酪胺殘基以及組胺殘基上的氫原子。蛋白質(zhì)、肽類等含有上述基團(tuán),可用125Ⅰ直接標(biāo)記,不含上述基團(tuán)的甾體激素或藥物分子,須連接相應(yīng)基團(tuán)才能用于放射性碘標(biāo)記。
(二)標(biāo)記及類型
1.直接標(biāo)記法:肽類、蛋白質(zhì)和酶的碘化標(biāo)記。常用的方法為:①氯胺 T(ch-T)法;②乳過氧化物酶標(biāo)記法。
2.間接標(biāo)記法:也稱連接標(biāo)記法,是最常用的間接碘標(biāo)記方法。該法主用于甾體類化合物、環(huán)核苷酸、前列腺素等缺乏碘標(biāo)記基團(tuán)的小分子化合物的標(biāo)記。
(三)放射標(biāo)記物的純化
1.凝膠過濾法:分子篩機(jī)制。
2.離子交換層析法:游離125Ⅰ與標(biāo)記物分子極性差異進(jìn)行吸附解離。
3.聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE):按分子所帶電荷和直徑不同在電場作用下分子遷移速率不同。
4.高效液相色譜法。
(四)放射標(biāo)記的鑒定
1.放射化學(xué)純度:單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率,要求>95%。該參數(shù)還是觀察在貯存期內(nèi)標(biāo)記物脫碘程度的重要指標(biāo)。
2.免疫活性:制備的標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力。
3.比放射活性:單位化學(xué)量標(biāo)記物中所含的放射性強(qiáng)度,即每分子被標(biāo)記物平均所結(jié)合放射性原子數(shù)目。
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