均相酶免疫測(cè)定如何進(jìn)行的?
均相酶免疫測(cè)定如何進(jìn)行的?為了幫助更多考生了解,醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)為大家搜集整理如下:
利用酶標(biāo)志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理,可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)志物分離的情況下,通過(guò)測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變,而確定抗原或抗體的含量。該法主要用于小分子激素和半抗原(如藥物)的測(cè)定,均相法的優(yōu)點(diǎn)是適合于自動(dòng)化測(cè)定,但反應(yīng)中被抑制的酶活力較小,需用靈敏的光度計(jì)測(cè)定,反應(yīng)的溫度也需嚴(yán)格控制。
(一)酶放大免疫測(cè)定技術(shù)(EMIT) EMIT的基本原理是半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原。當(dāng)與抗體結(jié)合后,所標(biāo)的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例,從酶活力的測(cè)定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。
(二)克隆酶供體免疫分析(CDEIA) DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶(如β-D半乳糖苷酶)分子的兩個(gè)片段,大片段稱為酶受體(EA),小分子稱作酶供體(ED),兩者單獨(dú)均無(wú)酶活性,一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性??寺∶腹w免疫測(cè)定(CDEIA)的反應(yīng)模式為競(jìng)爭(zhēng)法。
標(biāo)本中的抗原和酶供體(ED)標(biāo)記的抗原與特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,形成兩種抗原抗體復(fù)合物。ED標(biāo)記的抗原與抗體結(jié)合后由于空間位阻,不再能與酶受體(EA)結(jié)合,而游離的ED標(biāo)記的抗原上的ED可和EA結(jié)合,形成具有活性的酶,加入底物測(cè)定酶活性,酶活力的大小與標(biāo)本中抗原含量成正比。
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