
生物素-親和素系統(tǒng)可用于哪些免疫檢驗(yàn)技術(shù)?
生物素-親和素系統(tǒng)是一種高靈敏度的信號(hào)放大技術(shù),廣泛應(yīng)用于多種免疫檢驗(yàn)技術(shù)中。它主要利用了生物素與親和素之間極強(qiáng)的結(jié)合力,這種結(jié)合力比抗原抗體之間的結(jié)合力要強(qiáng)得多。在臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)領(lǐng)域,生物素-親和素系統(tǒng)可以用于以下幾個(gè)方面:
1.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA):在ELISA中,生物素化的抗體或抗原與固相載體上的待測(cè)物相結(jié)合后,加入親和素標(biāo)記的酶,通過底物顯色來檢測(cè)目標(biāo)物質(zhì)的存在。這種方法不僅提高了靈敏度,還能減少非特異性結(jié)合。
2.化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA):在化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定中,可以使用生物素-親和素系統(tǒng)進(jìn)行信號(hào)放大,提高檢測(cè)限。例如,將待測(cè)抗原或抗體先與生物素化的探針結(jié)合,再加入親和素標(biāo)記的發(fā)光劑,通過測(cè)量光強(qiáng)度來定量目標(biāo)物質(zhì)。
3.免疫印跡技術(shù)(Western Blot):在免疫印跡中,可以通過使用生物素化的一級(jí)或二級(jí)抗體,并配合HRP-親和素復(fù)合物進(jìn)行顯色反應(yīng),以增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào),使低豐度蛋白的檢測(cè)成為可能。
4.流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry):在流式細(xì)胞分析時(shí),可以利用生物素化的特異性抗體標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞表面或內(nèi)部抗原,再與熒光素標(biāo)記的親和素結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定細(xì)胞群體的精準(zhǔn)識(shí)別和定量分析。
5.免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemistry, IHC):在IHC中應(yīng)用生物素-親和素系統(tǒng)能夠顯著提高檢測(cè)靈敏度。通常先用生物素化的抗體與目標(biāo)抗原結(jié)合,然后加入鏈霉親和素標(biāo)記的酶或熒光探針進(jìn)行顯色。
6.免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP):在IP實(shí)驗(yàn)中也可以采用該系統(tǒng)來捕獲特定蛋白質(zhì)復(fù)合物。通過將目標(biāo)蛋白與生物素化的抗體共同孵育,再加入鏈霉親和素包被的磁珠或微球,可以有效地從復(fù)雜的樣品中分離出目的蛋白。
總之,生物素-親和素系統(tǒng)的應(yīng)用極大地提高了免疫檢驗(yàn)技術(shù)的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性,在臨床診斷
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