《臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)》第八章：熒光免疫技術(shù)，跟著小編來(lái)學(xué)習(xí)一下吧！

【知識(shí)點(diǎn)名稱(chēng)】熒光物質(zhì)

【進(jìn)階攻略】此知識(shí)點(diǎn)主要在《基礎(chǔ)知識(shí)》中考查，常以A1和B型題的形式出現(xiàn)。需熟練掌握各種熒光物質(zhì)的呈現(xiàn)顏色和吸收、發(fā)射波長(zhǎng)。

【知識(shí)點(diǎn)詳情】

熒光物質(zhì)

（一）熒光色素 許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱(chēng)為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：

1.異硫氰酸熒光素（FITC）　為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或乙醇等溶劑。分子量為389.4kD，最大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其主要優(yōu)點(diǎn)是：①人眼對(duì)黃綠色較為敏感；②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色熒光。

2.四乙基羅丹明（RB200）　為橘紅色粉末，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。最大吸收光波長(zhǎng)為570nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為595～600nm，呈橘紅色熒光。

3.四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）　最大吸引光波長(zhǎng)為550nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明，可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合，但熒光效率較低。

4.藻紅蛋白（R-RE）　本品為無(wú)定形，褐紅色粉末，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮，性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存。最大吸引光波長(zhǎng)為565nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為578nm，呈明亮的橙色熒光。與FITC的翠綠色熒光對(duì)比鮮明，故被廣泛用于對(duì)比染色或用于兩種不同顏色的熒光抗體的雙重染色。

（二）其他熒光物質(zhì)

1.鑭系螯合物　某些三價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3＋）、鋱（Tb3＋）、鈰（Ce3＋）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以Eu3＋應(yīng)用最廣。Eu3＋螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬，發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄，熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，最適合用于時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定。

2.酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)　某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性磷酸酶的底物是4-甲基傘酮磷酸鹽，辣根過(guò)氧化物酶的底物是對(duì)羥基苯乙酸等。

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