A.Taq酶

B.T4DNA連接酶

C.DNA聚合酶I

D.DNA聚合酶Ⅱ

E.DNA聚合酶Ⅲ

【正確答案】B

【答案解析】外源DNA片段和線狀質(zhì)粒載體的連接，也就是在雙鏈DNA5'磷酸和相鄰的3'羥基之間形成的新的共價(jià)鏈。如質(zhì)粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成4個(gè)新的磷酸二酯鏈。但如果質(zhì)粒DNA已去磷酸化，則吸能形成2個(gè)新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產(chǎn)生的兩個(gè)雜交體分子帶有2個(gè)單鏈切口，當(dāng)雜本導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞后可被修復(fù)。相鄰的5'磷酸和3'羥基間磷酸二酯鍵的形成可在體外由兩種不同的DNA連接酶催化，這兩種酶就是大腸桿菌DNA連接酶和T4噬菌體DNA連接酶。實(shí)際上在有克隆用途中，T4噬菌體DNA連接酶都是首選的用酶。這是因?yàn)樵谙率龇磻?yīng)條件下，它就能有效地將平端DNA片段連接起來。